दो सामान्य सूक्ष्मदर्शी अवलोकन विधियाँ
1. डार्क-फ़ील्ड अवलोकन
डार्क-फील्ड अवलोकन डार्क-फील्ड रोशनी का उपयोग करता है। उज्ज्वल-क्षेत्र अवलोकन के विपरीत, रोशन प्रकाश को सीधे नहीं देखा जाता है; केवल नमूने द्वारा परावर्तित या विवर्तित प्रकाश का ही पता लगाया जाता है। परिणामस्वरूप, देखने के क्षेत्र की पृष्ठभूमि गहरे रंग की होती है जबकि नमूना चमकीला दिखाई देता है।
डार्क-फ़ील्ड अवलोकन प्रकाशिकी में टाइन्डल प्रभाव पर आधारित है। प्रकाश विवर्तन के कारण प्रत्यक्ष तीव्र प्रकाश में धूल के कण मानव आँख के लिए अदृश्य होते हैं। जब प्रकाश कणों पर तिरछा प्रहार करता है, तो प्रकाश परावर्तन के कारण कण बड़े और दृश्यमान दिखाई देते हैं।
डार्क-फ़ील्ड अवलोकन के लिए आवश्यक विशेष सहायक एक डार्क-फ़ील्ड कंडेनसर है। यह प्रकाश किरण को नमूने के माध्यम से लंबवत ऊपर की ओर जाने से रोकता है। इसके बजाय, यह एक तिरछे कोण पर नमूने को रोशन करने के लिए प्रकाश को पुनर्निर्देशित करता है। प्रदीप्त प्रकाश सीधे वस्तुनिष्ठ लेंस में प्रवेश नहीं करता है, और उज्ज्वल छवियां नमूना सतह से परावर्तित और विवर्तित प्रकाश द्वारा बनती हैं। अंधेरे-क्षेत्र अवलोकन का रिज़ॉल्यूशन उज्ज्वल-क्षेत्र अवलोकन की तुलना में कहीं अधिक है, जो 0.02-0.004 μm तक पहुंचता है।
2. चरण-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी
ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के विकास में, चरण-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी का आविष्कार आधुनिक माइक्रोस्कोपी में एक बड़ी उपलब्धि का प्रतिनिधित्व करता है। मानव आँख केवल प्रकाश तरंगों की तरंग दैर्ध्य (रंग) और आयाम (चमक) को अलग कर सकती है। रंगहीन और पारदर्शी जैविक नमूनों के लिए, प्रकाश तरंग दैर्ध्य या आयाम में थोड़ा बदलाव के साथ गुजरता है, जिससे उन्हें उज्ज्वल-क्षेत्र स्थितियों के तहत निरीक्षण करना मुश्किल हो जाता है।
चरण-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी नमूने के ऑप्टिकल पथ अंतर के आधार पर निरीक्षण करता है। यह चरण अंतर (मानव आंख के लिए अदृश्य) को अलग-अलग आयाम अंतर में परिवर्तित करने के लिए प्रकाश के हस्तक्षेप का प्रभावी ढंग से उपयोग करता है। यहां तक कि रंगहीन पारदर्शी पदार्थों को भी स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है। यह जीवित कोशिकाओं के अवलोकन को बहुत सुविधाजनक बनाता है, इसलिए चरण-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी का व्यापक रूप से उल्टे माइक्रोस्कोप के साथ उपयोग किया जाता है।
चरण-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप का मूल सिद्धांत नमूने के माध्यम से प्रसारित दृश्य प्रकाश के ऑप्टिकल पथ अंतर को आयाम अंतर में परिवर्तित करना है, जिससे विभिन्न संरचनाओं के बीच कंट्रास्ट में सुधार होता है और उन्हें स्पष्ट रूप से दिखाई देता है। नमूने से गुजरने के बाद, प्रकाश अपवर्तित हो जाता है, अपने मूल पथ से भटक जाता है और तरंग दैर्ध्य के 1/4 से मंद हो जाता है। 1/4 तरंग दैर्ध्य की अतिरिक्त मंदता या प्रगति के परिणामस्वरूप 1/2 तरंग दैर्ध्य का कुल ऑप्टिकल पथ अंतर होता है। दो किरणें एक दूसरे पर आरोपित होती हैं और हस्तक्षेप करती हैं, कंट्रास्ट को बढ़ाने के लिए आयाम को बढ़ाती या घटाती हैं। संरचनात्मक रूप से, चरण-कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप में दो विशेष विशेषताएं हैं जो इसे सामान्य ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप से अलग करती हैं।
