सूक्ष्मदर्शी के लिए दो सामान्य रूप से प्रयुक्त अवलोकन दृष्टिकोण
1, डार्क फील्ड अवलोकन
दृश्य का अंधेरा क्षेत्र वास्तव में अंधेरे क्षेत्र की रोशनी है, इसकी विशेषताएं दृश्य के उज्ज्वल क्षेत्र से भिन्न हैं, क्योंकि यह सीधे रोशन प्रकाश का निरीक्षण नहीं करता है, बल्कि निरीक्षण की जा रही वस्तु के परावर्तित या विवर्तित प्रकाश का निरीक्षण करता है, इसलिए, दृश्य का क्षेत्र एक अंधेरे पृष्ठभूमि बन जाता है, जबकि निरीक्षण की जा रही वस्तु एक उज्ज्वल छवि प्रस्तुत करती है।
अंधेरे क्षेत्र का सिद्धांत ऑप्टिकल टाइन्डल घटना पर आधारित है, जहां तेज रोशनी के कारण होने वाले विवर्तन के कारण तेज रोशनी के संपर्क में आने पर धूल के कणों को मानव आंखों द्वारा नहीं देखा जा सकता है। यदि प्रकाश को तिरछा प्रक्षेपित किया जाता है, तो प्रकाश के परावर्तन के कारण कणों की मात्रा में वृद्धि होती है, जिससे वे मानव आंखों को दिखाई देते हैं।
डार्क फील्ड अवलोकन के लिए आवश्यक विशेष सहायक एक डार्क फील्ड स्पॉटलाइट है। इसकी विशेषता यह है कि यह प्रकाश की किरण को नीचे से ऊपर तक वस्तु से गुजरने की अनुमति नहीं देता है, लेकिन वस्तु की ओर तिरछी दिशा में प्रकाश के पथ को बदल देता है, ताकि रोशनी प्रकाश सीधे उद्देश्य लेंस में प्रवेश न कर सके, और निरीक्षण की जा रही वस्तु की सतह पर परावर्तन या विवर्तन प्रकाश द्वारा बनाई गई उज्ज्वल छवि का उपयोग करता है। डार्क फील्ड अवलोकन का रिज़ॉल्यूशन उज्ज्वल क्षेत्र अवलोकन की तुलना में बहुत अधिक है, जो ऊपर तक पहुंचता है। 0.02-0.004
2, चरण कंट्रास्ट दर्पण निरीक्षण विधि
ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के विकास में चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी का सफल आविष्कार आधुनिक माइक्रोस्कोपी तकनीक में एक महत्वपूर्ण उपलब्धि है। हम जानते हैं कि मानव आंख केवल प्रकाश तरंगों की तरंग दैर्ध्य (रंग) और आयाम (चमक) को अलग कर सकती है। रंगहीन और पारदर्शी जैविक नमूनों के लिए, जब प्रकाश गुजरता है, तो तरंग दैर्ध्य और आयाम ज्यादा नहीं बदलते हैं, जिससे उज्ज्वल क्षेत्र में नमूने का निरीक्षण करना मुश्किल हो जाता है।
चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप दर्पण निरीक्षण के लिए निरीक्षण की जा रही वस्तु की ऑप्टिकल पथ लंबाई में अंतर का उपयोग करता है, चरण अंतर को बदलने के लिए प्रकाश की हस्तक्षेप घटना का प्रभावी ढंग से उपयोग करता है जिसे मानव आंख द्वारा एक अलग आयाम अंतर में अलग नहीं किया जा सकता है। यहां तक कि रंगहीन और पारदर्शी पदार्थ भी स्पष्ट रूप से दिखाई दे सकते हैं, इससे जीवित कोशिकाओं के अवलोकन में काफी सुविधा होती है, इसलिए चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी का व्यापक रूप से उल्टे माइक्रोस्कोप में उपयोग किया जाता है।
चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी का मूल सिद्धांत नमूने से गुजरने वाले दृश्य प्रकाश के ऑप्टिकल पथ अंतर को आयाम अंतर में परिवर्तित करना है, जिससे विभिन्न संरचनाओं के बीच विरोधाभास में सुधार होता है और उन्हें स्पष्ट और दृश्यमान बनाया जाता है। नमूने से गुजरने के बाद, प्रकाश अपवर्तन से गुजरता है, मूल ऑप्टिकल पथ से भटक जाता है और 1/4 λ (तरंग दैर्ध्य) से विलंबित हो जाता है। यदि ऑप्टिकल पथ अंतर को 1/4 λ तक बढ़ाया या घटाया जाता है, तो ऑप्टिकल पथ अंतर 1/2 λ हो जाता है, और अक्ष के संयुक्त होने के बाद दो प्रकाश किरणों के बीच हस्तक्षेप बढ़ता या घटता है, कंट्रास्ट में सुधार होता है। संरचना के संदर्भ में, चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप में सामान्य ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप से दो विशेष अंतर होते हैं:
1. एक कुंडलाकार डायाफ्राम प्रकाश स्रोत और कंडेनसर के बीच स्थित होता है, और इसका कार्य प्रकाश का एक खोखला शंकु बनाना है जो कंडेनसर से गुजरता है और नमूने पर केंद्रित होता है
2. कोणीय चरण प्लेट: मैग्नीशियम फ्लोराइड से लेपित एक चरण प्लेट को ऑब्जेक्टिव लेंस में जोड़ा जाता है, जो प्रत्यक्ष या विवर्तित प्रकाश के चरण को 1/4 λ तक विलंबित कर सकता है। इसे दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है:
(1) . ए+चरण प्लेट: प्रत्यक्ष प्रकाश को 1/4 λ तक विलंबित करें, और अक्षों के संयोजन के बाद प्रकाश तरंगों के दो सेट जोड़ें। आयाम बढ़ जाता है, और नमूना संरचना आसपास के माध्यम की तुलना में उज्जवल हो जाती है, जिससे एक उज्ज्वल कंट्रास्ट (या नकारात्मक कंट्रास्ट) बनता है।
(2) . बी+फेज प्लेट: विवर्तित प्रकाश को 1/4 λ तक विलंबित करें, और प्रकाश किरणों के दो सेटों के अक्षों को संयोजित करने के बाद प्रकाश तरंगों को घटाएं, जिसके परिणामस्वरूप आयाम में कमी आएगी और एक डार्क कंट्रास्ट (या सकारात्मक कंट्रास्ट) बनेगा। संरचना आसपास के माध्यम की तुलना में अधिक गहरी हो जाती है
