लेजर कन्फोकल माइक्रोस्कोप और पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के बीच अंतर
लेजर स्कैनिंग कन्फोकल फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी एक अपेक्षाकृत उन्नत आणविक और कोशिका जीव विज्ञान विश्लेषण उपकरण है जो जैविक नमूनों के त्रि-आयामी डेटा प्राप्त करने के लिए कंप्यूटर, लेजर और छवि प्रसंस्करण तकनीक का उपयोग करता है। इसका उपयोग मुख्य रूप से जीवित कोशिकाओं की संरचना और विशिष्ट अणुओं और आयनों के जैविक परिवर्तनों, मात्रात्मक विश्लेषण और वास्तविक समय मात्रात्मक निर्धारण का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है।
लेजर कन्फोकल माइक्रोस्कोपी का सिद्धांत: बिंदु रोशनी और बिंदु पहचान का एहसास करने के लिए प्रकाश स्रोत के पीछे रखे गए रोशनी पिनहोल और डिटेक्टर के सामने रखे गए डिटेक्शन पिनहोल का उपयोग करें। रोशनी पिनहोल के माध्यम से प्रकाश स्रोत से उत्सर्जित प्रकाश को नमूने के फोकल विमान पर एक बिंदु पर केंद्रित किया जाता है, और इस बिंदु से उत्सर्जित प्रतिदीप्ति को डिटेक्शन पिनहोल पर चित्रित किया जाता है, और इस बिंदु के बाहर किसी भी उत्सर्जित प्रकाश को डिटेक्शन द्वारा अवरुद्ध कर दिया जाता है। पिनहोल. रोशनी पिनहोल और डिटेक्शन पिनहोल विकिरणित बिंदु या पता लगाए गए बिंदु से संयुग्मित होते हैं, इसलिए पता लगाया गया बिंदु कन्फोकल बिंदु होता है, और वह विमान जहां पता लगाया गया बिंदु स्थित होता है वह कन्फोकल विमान होता है।
कंप्यूटर पहचाने गए बिंदुओं को छवि बिंदुओं के रूप में कंप्यूटर स्क्रीन पर प्रदर्शित करता है। एक पूर्ण छवि उत्पन्न करने के लिए, ऑप्टिकल पथ में स्कैनिंग सिस्टम एक पूर्ण कन्फोकल छवि उत्पन्न करने के लिए नमूने के फोकल विमान पर स्कैन करता है। जब तक चरण Z अक्ष के साथ ऊपर और नीचे चलता रहता है, तब तक नमूने की एक नई परत को कन्फोकल विमान में ले जाया जाता है, और नमूने की नई परत को मॉनिटर पर चित्रित किया जाता है। Z अक्ष की निरंतर गति के साथ, नमूने की विभिन्न परतों की निरंतर छवियां प्राप्त की जा सकती हैं। हल्की कटी हुई छवि.
पारंपरिक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी के बीच अंतर
पारंपरिक प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में एक बड़ी कमी है: फोकल विमान के बाहर फ्लोरोसेंट संरचनाएं धुंधली और धुंधली होती हैं। इसका कारण यह है कि अधिकांश जैविक नमूनों में अतिव्यापी संरचनाएँ होती हैं। यदि फ्लोरोसेंटली लेबल वाली संरचनाएं विभिन्न स्तरों पर वितरित की जाती हैं और ओवरलैप होती हैं, तो फोकल प्लेन के ऊपर या नीचे से बिखरी हुई फ्लोरोसेंस भी ऑब्जेक्टिव लेंस द्वारा प्राप्त की जाती है, और फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप के रिज़ॉल्यूशन में काफी सुधार होगा। कम करना।
पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के आधार पर, लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोप प्रकाश स्रोत के रूप में लेजर प्रकाश का उपयोग करते हैं, संयुग्म फोकस के सिद्धांत और उपकरण को अपनाते हैं, और देखी गई वस्तुओं की डिजिटल छवि प्रसंस्करण, अवलोकन, विश्लेषण और आउटपुट करने के लिए कंप्यूटर का उपयोग करते हैं। कोशिकाओं की त्रि-आयामी स्थानिक संरचना के गैर-विनाशकारी अवलोकन और विश्लेषण के लिए नमूने को टोमोग्राफिक रूप से स्कैन और चित्रित किया जा सकता है। साथ ही, इम्यूनोफ्लोरेसेंट लेबलिंग और आयन फ्लोरोसेंट लेबलिंग जांच का उपयोग करके, यह तकनीक न केवल स्थिर कोशिकाओं और ऊतक वर्गों का निरीक्षण कर सकती है, बल्कि जीवित कोशिकाओं की संरचना, अणुओं, आयनों और जीवन गतिविधियों का वास्तविक समय गतिशील अवलोकन और पता भी लगा सकती है। उपकोशिकीय स्तर पर Ca2 प्लस, pH मान, झिल्ली क्षमता और कोशिका आकृति विज्ञान में परिवर्तन जैसे शारीरिक संकेतों का अवलोकन करना, आकृति विज्ञान, आणविक कोशिका जीव विज्ञान, तंत्रिका विज्ञान, औषध विज्ञान और आनुवंशिकी के क्षेत्र में शक्तिशाली अनुसंधान उपकरणों की एक नई पीढ़ी बन गया है।
