इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए जैविक नमूने तैयार करना और उनका निरीक्षण करना
माइक्रोस्कोप का रिज़ॉल्यूशन इस्तेमाल की गई रोशनी की तरंगदैर्ध्य पर निर्भर करता है, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप 1933 में दिखाई देने लगा था, क्योंकि इसमें प्रकाश स्रोत के रूप में इलेक्ट्रॉन बीम के दृश्यमान प्रकाश की तुलना में बहुत कम तरंगदैर्ध्य का उपयोग किया गया था, जिससे ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप की तुलना में इसका रिज़ॉल्यूशन बहुत बेहतर हो गया। अलग-अलग प्रकाश स्रोत भी इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप और ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के बीच अंतर की एक श्रृंखला निर्धारित करते हैं।
इलेक्ट्रॉन बीम के इमेजिंग सिद्धांत और विभिन्न तरीकों पर नमूने की भूमिका में अंतर के अनुसार, आधुनिक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप को कई प्रकार के रूप में विकसित किया गया है, वर्तमान में * आम तौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप है, पूर्व में परिवर्तन की सीमा के कुल आवर्धन के 1,000-1,000,000 गुना की सीमा में हो सकता है, बाद में परिवर्तनों के बीच कुल आवर्धन के 20-300,000 गुना की कुल आवर्धन में हो सकता है। यह प्रयोग दो प्रकार के माइक्रोस्कोप, ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के लिए नमूनों की तैयारी पर केंद्रित है।
सामग्री
1. तनाव एस्चेरिचिया कोलाई (Escherichia coli, एस्चेरिचिया कोली) तिरछा।
2. विलयन या अभिकर्मक एमाइल एसीटेट, सांद्र सल्फ्यूरिक एसिड, निर्जल इथेनॉल, बाँझ जल, 2% सोडियम फॉस्फोटंगस्टिक एसिड (pH 6.5-8.0) जलीय घोल, 0.3% पॉलीविनाइल फॉर्मेल्डिहाइड (ट्राइक्लोरोमेथेन में घुला हुआ) घोल, साइटोक्रोम सी, अमोनियम एसीटेट, प्लास्मिड pBR322।
3. उपकरण या अन्य सामग्री साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप, तांबे की जाली, चीनी मिट्टी की कीप, बीकर, फ्लैट डिश, स्टेराइल ब्यूरेट, स्टेराइल चिमटी, लैंसेट, स्लाइड, ** गिनती प्लेट, वैक्यूम कोटर, क्रिटिकल पॉइंट ड्रायर इत्यादि।
संचालन चरण
(I) नमूना तैयार करना और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का अवलोकन
1. धातु जाल का उपचार
ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी के लिए नमूनों को अवलोकन के लिए स्लाइड पर रखा जाता है। हालांकि, ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में, चूंकि इलेक्ट्रॉन कांच की शीट में प्रवेश नहीं कर सकते हैं, इसलिए केवल जाली सामग्री का उपयोग वाहक के रूप में किया जा सकता है, जिसे आमतौर पर वाहक जाल कहा जाता है। वाहक जाल को विभिन्न सामग्रियों और आकृतियों के कारण कई अलग-अलग विशिष्टताओं में विभाजित किया जा सकता है, जिनमें से * आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला 200-400 जाल (छिद्रों की संख्या) तांबे की जाली है। तांबे की जाली पर गंदगी हटाने और इसे साफ रखने के लिए उपयोग करने से पहले उसका उपचार किया जाना चाहिए, अन्यथा यह सहायक फिल्म की गुणवत्ता और नमूने की तस्वीरों की स्पष्टता को प्रभावित करेगा। इस प्रयोग में प्रयुक्त तांबे की जाली 400 जाली की है, जिसका उपचार निम्न तरीके से किया जा सकता है: सबसे पहले इसे कुछ घंटों के लिए एमाइल एसीटेट से ब्लीच करें यदि उपरोक्त विधि से तांबे की जाली अभी भी साफ नहीं है, तो इसे पतला करने के लिए केंद्रित सल्फ्यूरिक एसिड (1: 1) को 1 ~ 2 मिनट में डुबोया जा सकता है, या 1% NaOH समाधान में कई मिनट तक उबाला जा सकता है, आसुत जल से कई बार धोया जा सकता है, निर्जल इथेनॉल निर्जलीकरण में रखा जा सकता है, उपयोग किया जा सकता है।
2. सपोर्ट फिल्म की तैयारी
नमूना अवलोकन में, वाहक नेटवर्क को भी असंरचित, एकसमान फिल्म की एक परत के साथ कवर किया जाना चाहिए, अन्यथा छोटे नमूने वाहक नेटवर्क में छेद से बाहर निकल जाएंगे, फिल्म की इस परत को आमतौर पर समर्थन फिल्म या वाहक फिल्म कहा जाता है। समर्थन फिल्म इलेक्ट्रॉनों के लिए पारदर्शी होनी चाहिए, और इसकी मोटाई आम तौर पर 20nm से कम होनी चाहिए; इलेक्ट्रॉन बीम के प्रभाव में, फिल्म में यांत्रिक शक्ति की एक निश्चित डिग्री भी होनी चाहिए, संरचना की स्थिरता बनाए रख सकती है, और अच्छी तापीय चालकता होनी चाहिए; इसके अलावा, समर्थन नेटवर्क में इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के नीचे कोई दृश्यमान संरचना नहीं होनी चाहिए, और ले जाए गए नमूने के साथ कोई रासायनिक प्रतिक्रिया नहीं होनी चाहिए, और नमूने के अवलोकन में हस्तक्षेप नहीं करना चाहिए, और इसकी मोटाई आम तौर पर लगभग 15nm है। समर्थन फिल्म प्लास्टिक फिल्म (जैसे फायर कॉटन फिल्म, पॉलीइथाइलीन फॉर्मेल्डिहाइड फिल्म, आदि), कार्बन फिल्म या धातु फिल्म (जैसे बेरिलियम फिल्म, आदि) से बनाई जा सकती है। नियमित कामकाजी परिस्थितियों में, आवश्यकताओं को प्लास्टिक की फिल्म से पूरा किया जा सकता है, जबकि आग कपास चिपकने वाली फिल्म में प्लास्टिक फिल्म की तैयारी अपेक्षाकृत आसान है, लेकिन ताकत पॉलीथीन फॉर्मेल्डिहाइड फिल्म जितनी मजबूत नहीं है।
