इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के लिए जैविक नमूनों की तैयारी और अवलोकन
माइक्रोस्कोप का रिज़ॉल्यूशन प्रयुक्त प्रकाश की तरंग दैर्ध्य पर निर्भर करता है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप, जो 1933 में उभरा, ने प्रकाश स्रोतों के रूप में दृश्य प्रकाश की तुलना में बहुत कम तरंग दैर्ध्य वाले इलेक्ट्रॉन बीम के उपयोग के कारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप की तुलना में काफी अधिक रिज़ॉल्यूशन हासिल किया। विभिन्न प्रकाश स्रोत इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप और ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के बीच अंतर की एक श्रृंखला भी निर्धारित करते हैं।
इलेक्ट्रॉन बीम इमेजिंग के सिद्धांतों और नमूनों पर उनके कार्य करने के तरीकों में अंतर के आधार पर, आधुनिक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप कई प्रकारों में विकसित हुए हैं। वर्तमान में, ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है। पहले में कुल आवर्धन होता है जो 1000-1000000 गुना के बीच भिन्न हो सकता है, जबकि बाद में कुल आवर्धन होता है जो 20-300000 बार के बीच भिन्न हो सकता है। यह प्रयोग मुख्य रूप से दो प्रकार के माइक्रोस्कोप नमूने, ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की तैयारी का परिचय देता है।
2, उपकरण
1. एस्चेरिचिया कोलाई स्ट्रेन झुका हुआ है।
2. समाधान या अभिकर्मक: पेंटाइल एसीटेट, सांद्र सल्फ्यूरिक एसिड, निर्जल इथेनॉल, बाँझ पानी, 2% सोडियम फॉस्फोटुंगस्टेट (पीएच 6.5-8.0) जलीय घोल, 0.3% पॉलीविनाइल फॉर्मेल्डिहाइड (क्लोरोफॉर्म में घुला हुआ) घोल, साइटोक्रोम सी, अमोनियम एसीटेट, प्लास्मिड पीबीआर322।
3. उपकरणों या अन्य उपकरणों में साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप, तांबे के जाल, चीनी मिट्टी के फ़नल, बीकर, पेट्री डिश, स्टेराइल ड्रॉपर, स्टेराइल चिमटी, पिन, ग्लास स्लाइड, काउंटिंग प्लेट, वैक्यूम कोटिंग मशीन, क्रिटिकल पॉइंट ड्रायर आदि शामिल हैं।
3, ऑपरेशन चरण
(1) ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए नमूनों की तैयारी और अवलोकन
1. धातु जाल का उपचार
ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का नमूना अवलोकन के लिए कांच की स्लाइड पर रखा जाता है। हालाँकि, एक ट्रांसमिशन दर्पण में, चूंकि इलेक्ट्रॉन कांच की शीट में प्रवेश नहीं कर सकते हैं, एक जाल सामग्री का उपयोग केवल वाहक के रूप में किया जा सकता है, जिसे आमतौर पर वाहक जाल के रूप में जाना जाता है। वाहक जाल को विभिन्न सामग्रियों और आकारों के कारण विभिन्न विशिष्टताओं में विभाजित किया जा सकता है, जिनमें से 200-400 जाल (छेदों की संख्या) के साथ तांबे के जाल का आमतौर पर उपयोग किया जाता है। किसी भी गंदगी को हटाने और इसे साफ रखने के लिए उपयोग से पहले तांबे की जाली का उपचार किया जाना चाहिए, अन्यथा यह सहायक फिल्म की गुणवत्ता और नमूना तस्वीरों की स्पष्टता को प्रभावित करेगा। इस प्रयोग में प्रयुक्त 400 जाली तांबे की जाली को निम्नलिखित विधि से उपचारित किया जा सकता है: सबसे पहले, कुछ घंटों के लिए पेंटाइल एसीटेट के साथ भिगोएँ और तैरें, फिर आसुत जल से कई बार कुल्ला करें, और अंत में निर्जलीकरण के लिए तांबे की जाली को निर्जल इथेनॉल में डुबोएँ और तैराएँ। यदि उपरोक्त विधियों के बाद भी तांबे का जाल साफ नहीं है, तो इसे 1-2 मिनट के लिए पतला केंद्रित सल्फ्यूरिक एसिड (1: 1) में भिगोया जा सकता है, या कुछ मिनटों के लिए 1% NaOH समाधान में उबाला जा सकता है, आसुत जल से कई बार धोया जा सकता है, और फिर बाद में उपयोग के लिए निर्जल इथेनॉल में निर्जलित किया जा सकता है।
