प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के लिए संचालन निर्देश और सावधानियां
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत देखी गई प्रतिदीप्ति छवियों में रूपात्मक विशेषताओं के साथ-साथ प्रतिदीप्ति रंग और चमक भी होती है। व्यापक परिणाम मूल्यांकन के लिए दोनों कारकों को जोड़ा जाना चाहिए। परिणाम रिकॉर्डिंग ऑपरेटरों द्वारा दृश्य अवलोकन के आधार पर व्यक्तिपरक संकेतकों पर निर्भर करती है, जो आम तौर पर नियमित गुणात्मक अवलोकन के लिए विश्वसनीय होती है। प्रौद्योगिकी में प्रगति के साथ, दस्तावेज़ीकरण और मूल्यांकन के लिए माइक्रोस्पेक्ट्रोफोटोमीटर और छवि विश्लेषक जैसे वस्तुनिष्ठ उपकरणों का तेजी से उपयोग किया जा रहा है। फिर भी, इन उपकरणों से प्राप्त परिणामों को अभी भी व्यक्तिपरक व्याख्या की आवश्यकता है।
प्रतिदीप्ति छवियों के दस्तावेजीकरण के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के साथ फोटोग्राफी आवश्यक है। चूंकि प्रतिदीप्ति तेजी से खत्म हो जाती है, इसलिए परिणामों की तुरंत तस्वीर खींची जानी चाहिए। प्रक्रिया काफी हद तक पारंपरिक फोटोमाइक्रोग्राफी के समान है, सिवाय इसके कि एएसए 200 या उच्चतर की उच्च गति वाली फोटोग्राफिक फिल्मों की आवश्यकता होती है। पराबैंगनी प्रकाश गंभीर प्रतिदीप्ति फोटोब्लीचिंग का कारण बनता है। उदाहरण के लिए, FITC-लेबल वाले नमूने यूवी विकिरण के 30 सेकंड के बाद अपनी प्रतिदीप्ति चमक का 50% खो देते हैं। इसलिए, धीमा एक्सपोज़र प्रतिदीप्ति छवियों को कैप्चर करने में विफल रहेगा। अधिकांश अनुसंधान-ग्रेड प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी अर्ध-स्वचालित या पूरी तरह से स्वचालित फोटोमाइक्रोग्राफ़ी सिस्टम से सुसज्जित हैं।
सावधानियां
① प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के निर्माता के मैनुअल के अनुसार सख्ती से संचालन करें; परिचालन प्रक्रियाओं में मनमाने ढंग से बदलाव न करें। ② अवलोकन अंधेरे कमरे में किया जाना चाहिए। अंधेरे कमरे में प्रवेश करने के बाद, बिजली चालू करें और उच्च दबाव वाले पारा लैंप को 5-15 मिनट के लिए प्रज्वलित करें। प्रकाश स्रोत स्थिर होने और आपकी आंखें पूरी तरह से अंधेरे के अनुकूल होने के बाद ही नमूना अवलोकन शुरू करें।
③ अपनी आंखों को पराबैंगनी विकिरण से बचाएं। प्रकाश स्रोत को समायोजित करते समय सुरक्षात्मक चश्मा पहनें।
④ प्रत्येक अवलोकन सत्र 1-2 घंटे तक चलने की अनुशंसा की जाती है। अति-उच्च दबाव पारा लैंप की चमकदार तीव्रता 90 मिनट के बाद धीरे-धीरे कम हो जाती है, और प्रतिदीप्ति तदनुसार कमजोर हो जाती है। यूवी एक्सपोज़र के 3-5 मिनट के बाद नमूनों की प्रतिदीप्ति भी स्पष्ट रूप से फीकी पड़ जाती है। अधिकतम निरंतर अवलोकन समय 2-3 घंटे से अधिक नहीं होना चाहिए।
⑤ प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप प्रकाश स्रोत का सेवा जीवन सीमित है। समय बचाने और लैंप के जीवन को बढ़ाने के लिए बैचों में नमूनों की जांच करें। गर्म वातावरण में गर्मी अपव्यय के लिए बिजली के पंखे का उपयोग करें। लैंप बदलने के बाद शुरू से ही परिचालन समय रिकॉर्ड करें। यदि लैंप बुझ जाता है, तो फिर से चालू होने से पहले उसके पूरी तरह से ठंडा होने तक प्रतीक्षा करें। लैंप को बार-बार चालू करने से बचें।
⑥ रंगने के तुरंत बाद दाग वाले नमूनों का निरीक्षण करें, क्योंकि समय के साथ प्रतिदीप्ति फीकी पड़ जाएगी। प्रतिदीप्ति क्षय को धीमा करने और बढ़ते माध्यम के वाष्पीकरण को रोकने के लिए नमूनों को पॉलीथीन प्लास्टिक बैग में 4 डिग्री पर संग्रहीत किया जा सकता है।
⑦ प्रतिदीप्ति तीव्रता के लिए ग्रेडिंग मानक: आम तौर पर चार ग्रेड अपनाए जाते हैं: "-": कोई प्रतिदीप्ति नहीं या केवल बेहोश प्रतिदीप्ति पता लगाने योग्य "+": बमुश्किल पता लगाने योग्य लेकिन निश्चित प्रतिदीप्ति संकेत "++": उज्ज्वल प्रतिदीप्ति दिखाई देती है
