उल्टे माइक्रोस्कोप और प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के बीच चयन कैसे करें?
माइक्रोस्कोप कोशिका संवर्धन और संबंधित व्युत्पन्न प्रयोगों में एक महत्वपूर्ण उपकरण है। वर्तमान में, बाज़ार में विभिन्न प्रकार के सूक्ष्मदर्शी उपलब्ध हैं, और ऐसा सूक्ष्मदर्शी चुनना जो आवश्यकताओं को पूरा करता हो और उपयुक्त हो, एक चुनौती है। नीचे, हम हर किसी के चयन के लिए उल्टे सूक्ष्मदर्शी और प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के सिद्धांतों का परिचय देंगे।
उल्टे माइक्रोस्कोप में, एक नियमित माइक्रोस्कोप की तरह, मुख्य रूप से तीन भाग होते हैं: यांत्रिक भाग, प्रकाश भाग और ऑप्टिकल भाग। एक उल्टे माइक्रोस्कोप की संरचना एक नियमित ईमानदार माइक्रोस्कोप के समान होती है, सिवाय इसके कि ऑब्जेक्टिव लेंस और प्रकाश व्यवस्था उलट जाती है, पहला मंच के नीचे और दूसरा मंच के ऊपर होता है। यह संरचना प्रकाश स्पॉटलाइट प्रणाली और मंच के बीच प्रभावी दूरी को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ाती है, जिससे मोटे अवलोकन उपकरण जैसे कि कल्चर डिश और सेल कल्चर बोतलें (बेशक, ग्लास स्लाइड का भी उपयोग किया जा सकता है) रखना आसान हो जाता है, जबकि बीच की कार्य दूरी वस्तुनिष्ठ लेंस और सामग्री का बहुत बड़ा होना आवश्यक नहीं है। उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग चिकित्सा और स्वास्थ्य संस्थानों, विश्वविद्यालयों और अनुसंधान संस्थानों द्वारा सूक्ष्मजीवों, कोशिकाओं, बैक्टीरिया, ऊतक संस्कृतियों, निलंबन, तलछट आदि के अवलोकन के लिए किया जाता है। यह संस्कृति माध्यम में कोशिका और जीवाणु प्रसार और विभाजन की प्रक्रिया का लगातार निरीक्षण कर सकता है, और इस प्रक्रिया के किसी भी रूप को कैप्चर कर सकता है. साइटोलॉजी, पैरासाइटोलॉजी, ऑन्कोलॉजी, इम्यूनोलॉजी, जेनेटिक इंजीनियरिंग, औद्योगिक माइक्रोबायोलॉजी और वनस्पति विज्ञान जैसे क्षेत्रों में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग कोशिकाओं के भीतर पदार्थों के अवशोषण, परिवहन, वितरण और स्थानीयकरण का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। परीक्षण की गई वस्तु के लिए, प्रतिदीप्ति उत्पन्न करने के दो तरीके हैं: सहज प्रतिदीप्ति, जो सीधे पराबैंगनी विकिरण द्वारा उत्सर्जित होती है; द्वितीयक प्रतिदीप्ति तब होती है जब देखी गई वस्तु को फ्लोरोसेंट रंगों से उपचारित किया जाता है और प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने से पहले पराबैंगनी प्रकाश के संपर्क में लाया जाता है। कोशिकाओं में कुछ पदार्थ, जैसे क्लोरोफिल, पराबैंगनी विकिरण के संपर्क में आने के बाद सहज प्रतिदीप्ति उत्पन्न करते हैं; कुछ पदार्थ स्वयं प्रतिदीप्ति उत्सर्जित नहीं कर सकते हैं, लेकिन यदि फ्लोरोसेंट रंगों या फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी से दागे जाते हैं, तो वे पराबैंगनी विकिरण के तहत द्वितीयक प्रतिदीप्ति भी उत्सर्जित कर सकते हैं। एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप उत्तेजना प्रकाश के रूप में एक रंग फ़िल्टरिंग प्रणाली के माध्यम से प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (यूवी 365 एनएम या यूवी नीला 420 एनएम) उत्सर्जित करने के लिए एक उच्च चमकदार दक्षता बिंदु प्रकाश स्रोत का उपयोग करता है, जो प्रतिदीप्ति के विभिन्न रंगों का उत्सर्जन करने के लिए नमूने में फ्लोरोसेंट पदार्थों को उत्तेजित करता है। उसके बाद, इसे ऑब्जेक्टिव लेंस और ऐपिस के आवर्धन के माध्यम से देखा जाता है। इस तरह, कमजोर प्रतिदीप्ति के साथ भी, यह आसानी से पहचानने योग्य है और मजबूत विपरीत पृष्ठभूमि के तहत अत्यधिक संवेदनशील है। इसका उपयोग मुख्य रूप से कोशिका संरचना, कार्य और रासायनिक संरचना का अध्ययन करने के लिए किया जाता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी को दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है: संचरण प्रकार और गिरने वाला प्रकार। पहला अधिक आदिम है, जबकि दूसरा अधिक उन्नत है। दो प्रकार के प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का मूल निर्माण समान है, मुख्य अंतर यह है कि संचरित उत्तेजना प्रकाश नमूने से होकर गुजरता है, जिससे संपूर्ण प्रतिदीप्ति उत्पन्न होती है। फिर प्रतिदीप्ति वस्तुनिष्ठ लेंस में प्रवेश करती है, और आवर्धन जितना अधिक होगा, प्रतिदीप्ति उतनी ही कमजोर होगी; गिरती हुई उत्तेजना प्रकाश नमूने की सतह पर प्रक्षेपित होती है, जिससे प्रतिदीप्ति उत्पन्न होती है जो वस्तुनिष्ठ लेंस में प्रवेश करती है। आवर्धन जितना अधिक होगा, प्रतिदीप्ति उतनी ही मजबूत होगी, जो इसे उच्च-शक्ति अवलोकन के लिए उपयुक्त बनाती है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के मुख्य घटकों में एक पारा लैंप प्रकाश स्रोत, एक उत्तेजना फिल्टर प्लेट, एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (ड्रॉप प्रकार), एक दमन फिल्टर प्लेट और एक डार्क फील्ड कंडेनसर (ट्रांसमिशन प्रकार) शामिल हैं। इसके अलावा, पारा लैंप के गंभीर ताप के कारण, उनमें से अधिकांश गर्मी अवशोषित फिल्टर से भी सुसज्जित हैं। कुछ प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में एक चरण कंट्रास्ट उद्देश्य और एक गोलाकार एपर्चर भी होता है, जो चरण कंट्रास्ट अवलोकन की अनुमति देता है। कुछ प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी एक उलटी संरचना अपनाते हैं, जो एक उलटा सूक्ष्मदर्शी भी है, इत्यादि।
इसके अलावा, उपर्युक्त सूक्ष्मदर्शी को सीसीडी स्थापित करके डिजिटल माइक्रोस्कोप में जोड़ा जा सकता है, जो माइक्रोस्कोप द्वारा देखी गई भौतिक छवियों को डिजिटल एनालॉग छवियों में परिवर्तित करता है और उन्हें कंप्यूटर पर चित्रित करता है। परिणामस्वरूप, हम अपने अनुसंधान को सूक्ष्म क्षेत्र में पारंपरिक दूरबीन अवलोकन से डिस्प्ले के माध्यम से पुनरुत्पादन में स्थानांतरित कर सकते हैं, जिससे कार्य कुशलता में सुधार होगा।
