इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी नमूने कैसे तैयार किये जाते हैं?
1. प्रक्षेपण विधि
वैक्यूम स्थितियों के तहत, नमूने की सतह पर मजबूत इलेक्ट्रॉन बिखरने की क्षमता वाले भारी धातु परमाणुओं का छिड़काव किया जाता है, ताकि नमूने और अप्रकाशित क्षेत्र के बीच एक मजबूत कंट्रास्ट बन जाए, और अप्रकाशित भाग नमूने का प्रक्षेपण बन जाए। प्रक्षेपण के अनुसार, हम नमूने के त्रि-आयामी आकार और ऊंचाई को समझ सकते हैं, और इस विधि का उपयोग आमतौर पर बैक्टीरिया के फ्लैगेल्ला या वायरस के कणों का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है।
2. नकारात्मक धुंधलापन विधि
चूँकि यह विधि नमूने को उजागर करने के लिए नमूने की पृष्ठभूमि पर दाग लगाती है, इसलिए इसे नकारात्मक धुंधलापन कहा जाता है। आम तौर पर, नमूना एक ऐसे पदार्थ से घिरा होता है जिसमें उच्च इलेक्ट्रॉन घनत्व होता है, कोई संरचना नहीं दिखती है, और नमूने के साथ प्रतिक्रिया नहीं करता है, जैसे फॉस्फोटुंगस्टिक एसिड का सोडियम नमक। आकार कुछ हद तक नमूने की आंतरिक संरचना को भी प्रतिबिंबित कर सकता है। इस प्रकार जीवाणु कोशिकाएँ, विषाणु आदि देखे जा सकते हैं।
3. अल्ट्राथिन अनुभाग विधि
यह सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली विधि है क्योंकि यह कोशिकाओं या अन्य नमूनों के अंदर बारीक संरचनाओं के अवलोकन की अनुमति देती है। आम तौर पर एक निश्चित प्रक्रिया के अनुसार नमूने को ठीक करना, इसे निर्जलित करना, फिर इसे एक समर्थन के रूप में राल में एम्बेड करना और इसे अल्ट्रा-पतली माइक्रोटोम के साथ बहुत पतली स्लाइस में काटना आवश्यक होता है। क्योंकि ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप से केवल 20 से 100 नैनोमीटर की मोटाई वाले स्लाइस ही देखे जा सकते हैं, सामान्य जीवाणु नमूनों में, एक कोशिका को 10 से 50 स्लाइस में विभाजित किया जाना चाहिए।
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