प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी तकनीकी पैरामीटर प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी तकनीक और तरीके
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप तकनीकी पैरामीटर 1. वाइड-एंगल ऐपिस 2. अक्रोमेटिक ऑब्जेक्टिव लेंस 3. चार-छेद ऑब्जेक्टिव लेंस कनवर्टर 4. एपी-फ्लोरोसेंट डिवाइस ब्लू (बी) ग्रीन (जी) उत्तेजना प्रणाली 1 00W पारा लैंप 5। समाक्षीय मोटे और बारीक फोकस समायोजन तंत्र: समायोजन फोकस रेंज: 15 मिमी माइक्रो-मूवमेंट ग्रिड मान: 0.002 मिमी 6. डबल-लेयर मैकेनिकल टेबल अनुदैर्ध्य मूवमेंट रेंज: 70 मिमी लेटरल मूवमेंट रेंज: 50 मिमी
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप तकनीकी पैरामीटर
1. वाइड-एंगल ऐपिस
2. अक्रोमैटिक ऑब्जेक्टिव लेंस
3. चार-एपर्चर नोजपीस
4. एपी-प्रतिदीप्ति उपकरण नीला (बी) हरा (जी) उत्तेजना प्रणाली 100W पारा लैंप
5. समाक्षीय मोटे और ठीक फोकस समायोजन तंत्र: फोकस रेंज 15 मिमी ठीक आंदोलन ग्रिड मूल्य 0.002 मिमी
6. डबल-लेयर मैकेनिकल कार्यक्षेत्र
लंबवत गति सीमा: 70 मिमी पार्श्व गति सीमा: 50 मिमी
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी कौशल और तरीके
(1) ग्लास स्लाइड
ग्लास स्लाइड की मोटाई 0.8 और 1.2 मिमी के बीच होनी चाहिए। एक स्लाइड जो बहुत मोटी है वह एक ओर अधिक प्रकाश को अवशोषित करेगी, और दूसरी ओर, उत्तेजना प्रकाश को नमूने पर केंद्रित नहीं किया जा सकता है। स्लाइड चिकनी, मोटाई में एक समान और स्पष्ट ऑटोफ्लोरेसेंस से मुक्त होनी चाहिए। कभी-कभी क्वार्ट्ज ग्लास स्लाइड का उपयोग किया जाता है।
(2) शीशे को ढक देना
कवर ग्लास की मोटाई लगभग 0.17 मिमी, चिकनी है। उत्तेजना प्रकाश को मजबूत करने के लिए, एक हस्तक्षेप कवर ग्लास का भी उपयोग किया जा सकता है, जो पदार्थों की कई परतों (जैसे मैग्नीशियम फ्लोराइड) के साथ लेपित एक विशेष कवर ग्लास होता है, जिसका विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश पर अलग-अलग हस्तक्षेप प्रभाव होता है, जो बना सकता है प्रतिदीप्ति सुचारू रूप से चलती है। रोमांचक प्रकाश को पार किया जाता है और परावर्तित किया जाता है, और यह परावर्तित उत्तेजना प्रकाश नमूने को उत्तेजित करता है।
(3) नमूना
ऊतक के टुकड़े या अन्य नमूने बहुत मोटे नहीं होने चाहिए। यदि यह बहुत गाढ़ा है, तो अधिकांश उत्तेजना प्रकाश नमूने के निचले हिस्से में खपत होगा, जबकि वस्तुनिष्ठ लेंस द्वारा सीधे देखा गया ऊपरी हिस्सा पूरी तरह से उत्तेजित नहीं होगा। इसके अलावा, सेल ओवरलैपिंग या अशुद्धता आवरण, निर्णय को प्रभावित करते हैं।
(4) माउंटिंग एजेंट
ग्लिसरीन का उपयोग आमतौर पर माउंटिंग एजेंट के रूप में किया जाता है, जिसमें कोई ऑटोफ्लोरेसेंस नहीं होना चाहिए, रंगहीन और पारदर्शी होना चाहिए, और पीएच 8 पर फ्लोरोसेंस की चमक तेज होती है। इसलिए, ग्लिसरॉल और 0.5mol/l कार्बोनेट बफर समाधान का पीएच 9.{6}} से 9.5 के बराबर मिश्रण आमतौर पर माउंटिंग एजेंट के रूप में उपयोग किया जाता है।
(5) दर्पण तेल
आम तौर पर, जब नमूनों को डार्क-फील्ड प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और तेल विसर्जन विसर्जन लेंस के साथ देखा जाता है, तो विसर्जन तेल का उपयोग किया जाना चाहिए। विशेष गैर-फ्लोरोसेंट विसर्जन तेल का उपयोग करना सबसे अच्छा है। इसके स्थान पर उपरोक्त ग्लिसरीन का भी उपयोग किया जा सकता है और तरल पैराफिन का भी उपयोग किया जा सकता है, लेकिन अपवर्तनांक कम होता है, जिससे छवि गुणवत्ता पर थोड़ा प्रभाव पड़ता है। प्रभाव।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का सिद्धांत और संरचनात्मक विशेषताएं
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए नमूने में फ्लोरोसेंट पदार्थों को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश के रूप में फिल्टर सिस्टम के माध्यम से एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (जैसे पराबैंगनी प्रकाश 3650 इंच या बैंगनी नीली रोशनी 4200 इंच) के प्रकाश को उत्सर्जित करने के लिए उच्च चमकदार दक्षता वाले एक बिंदु का उपयोग करती है। विभिन्न रंगों के बाद, ऑब्जेक्टिव लेंस और ऐपिस के आवर्धन के माध्यम से निरीक्षण करें। इस तरह, एक मजबूत कंट्रास्ट पृष्ठभूमि के तहत, भले ही प्रतिदीप्ति बहुत कमजोर हो, इसे पहचानना आसान है और इसमें उच्च संवेदनशीलता है। इसका उपयोग मुख्य रूप से कोशिका संरचना और कार्य और रासायनिक संरचना के अनुसंधान के लिए किया जाता है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप की मूल संरचना एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप और कुछ सहायक उपकरण (जैसे एक फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत, एक उत्तेजना फिल्टर, एक दो-रंग बीम स्प्लिटर और एक अवरुद्ध फिल्टर, आदि) से बनी होती है। फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत - आम तौर पर अल्ट्रा-उच्च दबाव पारा लैंप (50-200W) का उपयोग करते हैं, जो विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश का उत्सर्जन कर सकता है, लेकिन प्रत्येक फ्लोरोसेंट पदार्थ में एक उत्तेजना तरंग दैर्ध्य होता है जो सबसे मजबूत प्रतिदीप्ति पैदा करता है, इसलिए एक उत्तेजना फिल्टर (आम तौर पर, इसमें पराबैंगनी, बैंगनी, नीले और हरे उत्तेजना फिल्टर होते हैं), जो केवल एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के उत्तेजना प्रकाश को गुजरने देते हैं और अन्य प्रकाश को अवशोषित करते हुए नमूने को विकिरणित करते हैं। प्रत्येक पदार्थ को उत्तेजना प्रकाश द्वारा विकिरणित करने के बाद, यह बहुत ही कम समय में विकिरण तरंग दैर्ध्य की तुलना में लंबी तरंग दैर्ध्य के साथ दृश्यमान प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। प्रतिदीप्ति विशिष्ट है और आमतौर पर उत्तेजना प्रकाश की तुलना में कमजोर है। विशिष्ट प्रतिदीप्ति का निरीक्षण करने के लिए, ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे अवरोधन (या दमन) जोड़ा जाना चाहिए और इसके साथ संयोजन में उपयोग किया जाना चाहिए।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और साधारण सूक्ष्मदर्शी के बीच अंतर
1. रोशनी विधि आम तौर पर एपिस्कोपिक होती है, यानी प्रकाश स्रोत को ऑब्जेक्टिव लेंस के माध्यम से नमूने पर प्रक्षेपित किया जाता है;
2. प्रकाश स्रोत पराबैंगनी प्रकाश है, तरंग दैर्ध्य छोटा है, और रिज़ॉल्यूशन सामान्य सूक्ष्मदर्शी की तुलना में अधिक है;
3. दो विशेष फिल्टर हैं, एक प्रकाश स्रोत के सामने का उपयोग दृश्य प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है, और एक ऐपिस और ऑब्जेक्टिव लेंस के बीच का उपयोग मानव आंख की सुरक्षा के लिए पराबैंगनी किरणों को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप भी एक प्रकार का ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप है, मुख्य अंतर यह है कि दोनों की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य अलग-अलग है। यह संरचना और उपयोग के संदर्भ में प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के बीच अंतर को निर्धारित करता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी इम्यूनोफ्लोरेसेंट साइटोकैमिस्ट्री में एक आवश्यक उपकरण है। यह प्रकाश स्रोत, फिल्टर प्लेट सिस्टम और ऑप्टिकल सिस्टम जैसे मुख्य घटकों से बना है। यह प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए नमूने को उत्तेजित करने के लिए प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य का उपयोग करना है, और उद्देश्य लेंस और ऐपिस प्रणाली को बढ़ाकर नमूने की प्रतिदीप्ति छवि का निरीक्षण करना है।
