प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी सिद्धांत और संरचनात्मक विशेषताएं
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी बिंदु की उच्च चमक दक्षता का उपयोग है, रंग प्रणाली के निस्पंदन के माध्यम से प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (जैसे पराबैंगनी 3650 में या बैंगनी-नीला 4200 में) को उत्तेजित प्रकाश के रूप में उत्सर्जित करने के लिए, नमूने के भीतर प्रतिदीप्ति सामग्री की उत्तेजना प्रतिदीप्ति के विभिन्न रंगों की एक किस्म का उत्सर्जन करती है, और फिर अवलोकन के लिए उद्देश्य और ऐपिस के माध्यम से आवर्धित होती है। इस तरह, मजबूत विपरीत पृष्ठभूमि में, भले ही प्रतिदीप्ति बहुत कमजोर हो, इसे पहचानना आसान है, उच्च संवेदनशीलता, मुख्य रूप से कोशिका संरचना और कार्य और रासायनिक संरचना के अध्ययन के लिए उपयोग की जाती है। एक प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी की मूल संरचना एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप और कुछ सहायक उपकरण (जैसे प्रतिदीप्ति प्रकाश स्रोत, उत्तेजना फिल्टर, दोहरे रंग बीम विभाजक और अवरोधक फिल्टर, आदि) से बनी होती है। फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत - आम तौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला अल्ट्राहाई-प्रेशर मर्करी लैंप (50-200W), जो प्रकाश की विभिन्न तरंगदैर्ध्य का उत्सर्जन कर सकता है, लेकिन प्रत्येक फ्लोरोसेंट पदार्थ में सबसे मजबूत फ्लोरोसेंस उत्तेजना तरंगदैर्ध्य होता है, इसलिए उत्तेजना फिल्टर (आमतौर पर पराबैंगनी, बैंगनी, नीला और हरा उत्तेजना फिल्टर) जोड़ने की आवश्यकता होती है, ताकि नमूनों के विकिरण के माध्यम से केवल एक निश्चित तरंगदैर्ध्य का उत्तेजना प्रकाश हो, जबकि अन्य प्रकाश अवशोषित हो जाता है। इसलिए एक उत्तेजना फिल्टर (आमतौर पर पराबैंगनी, बैंगनी, नीला और हरा उत्तेजना फिल्टर) जोड़ना आवश्यक है, ताकि नमूने के माध्यम से केवल एक निश्चित तरंगदैर्ध्य का उत्तेजना प्रकाश हो, जबकि अन्य प्रकाश अवशोषित हो जाता है। जब प्रत्येक पदार्थ को उत्तेजना प्रकाश से विकिरणित किया जाता है, तो यह बहुत ही कम समय के भीतर विकिरणित प्रकाश की तुलना में लंबी तरंगदैर्ध्य का दृश्यमान प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। प्रतिदीप्ति में विशिष्टता होती है, जो आम तौर पर उत्तेजना प्रकाश से कमजोर होती है, विशिष्ट प्रतिदीप्ति का निरीक्षण करने में सक्षम होने के लिए, अवरोध (या दमन) को जोड़ने की आवश्यकता के पीछे उद्देश्य लेंस का उपयोग करने के लिए चयन किया जाना चाहिए।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और साधारण सूक्ष्मदर्शी में अंतर
1. रोशनी विधि आमतौर पर गिर रही है, यानी, प्रकाश स्रोत उद्देश्य लेंस के माध्यम से नमूने पर पेश किया जाता है;
2. प्रकाश स्रोत पराबैंगनी प्रकाश है, जिसमें साधारण सूक्ष्मदर्शी की तुलना में छोटी तरंगदैर्ध्य और उच्च संकल्प शक्ति होती है;
3. इसमें दो विशेष फिल्टर हैं, प्रकाश स्रोत के सामने वाला फिल्टर दृश्य प्रकाश को फिल्टर करने के लिए उपयोग किया जाता है, तथा ऐपिस और ऑब्जेक्टिव लेंस के बीच वाला फिल्टर मानव आंख की सुरक्षा के लिए पराबैंगनी प्रकाश को फिल्टर करने के लिए उपयोग किया जाता है।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी भी एक प्रकार का प्रकाशीय सूक्ष्मदर्शी है, मुख्य अंतर यह है कि दोनों की उत्तेजना तरंगदैर्घ्य भिन्न होती है। यह प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और साधारण प्रकाशीय सूक्ष्मदर्शी की संरचना और विभिन्न तरीकों के उपयोग को निर्धारित करता है।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी इम्यूनोफ्लोरेसेंस साइटोकैमिस्ट्री के लिए बुनियादी उपकरण है। यह प्रकाश स्रोत, फिल्टर प्लेट सिस्टम और ऑप्टिकल सिस्टम और अन्य प्रमुख घटकों से बना है। यह नमूने को प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए प्रेरित करने के लिए प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य का उपयोग करता है, जिसे नमूने की प्रतिदीप्ति छवि का निरीक्षण करने के लिए ऑब्जेक्टिव लेंस और ऐपिस सिस्टम के माध्यम से बढ़ाया जाता है।
