प्रकाश पथ के सिद्धांत के अनुसार प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी को दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है:
1. ट्रांसमिशन फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप
पुराने प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में, उत्तेजना प्रकाश स्रोत प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए एक कंडेनसर के माध्यम से नमूना सामग्री से होकर गुजरता है। इसका लाभ यह है कि प्रतिदीप्ति कम आवर्धन पर मजबूत होती है, लेकिन नुकसान यह है कि आवर्धन बढ़ने पर प्रतिदीप्ति कमजोर हो जाती है। इसलिए यह केवल बड़े नमूना सामग्रियों के अवलोकन के लिए उपयुक्त है।
2.एपिफ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी
उत्तेजित प्रकाश, ऑब्जेक्टिव लेंस से नमूने की सतह पर नीचे की ओर गिरता है, अर्थात, एक ही ऑब्जेक्टिव लेंस का उपयोग प्रदीप्ति संघनित्र के रूप में तथा प्रतिदीप्ति एकत्रित करने के लिए ऑब्जेक्टिव लेंस के रूप में किया जाता है।
ऑप्टिकल पथ में एक डाइक्रोइक बीम स्प्लिटर (डाइक्रोइक मिरर) जोड़ने की आवश्यकता है, जो ऑप्टिकल अक्ष से 45 डिग्री के कोण पर है। उत्तेजना प्रकाश ऑब्जेक्टिव लेंस में परावर्तित होता है और नमूने पर केंद्रित होता है। नमूने द्वारा उत्पन्न प्रतिदीप्ति ऑब्जेक्टिव लेंस और कवर की सतह से परावर्तित होती है। ग्लास स्लाइड की सतह पर परावर्तित उत्तेजना प्रकाश एक ही समय में ऑब्जेक्टिव लेंस में प्रवेश करता है और उत्तेजना प्रकाश और प्रतिदीप्ति को अलग करने के लिए डाइक्रोइक बीम स्प्लिटर में वापस आता है। शेष उत्तेजना प्रकाश को फिर ब्लॉकिंग फ़िल्टर द्वारा अवशोषित किया जाता है। यदि आप अलग-अलग उत्तेजना फ़िल्टर/दोहरे रंग की बीम स्प्लिटर/ब्लॉकिंग फ़िल्टर संयोजन आवेषण का उपयोग करते हैं, तो आप विभिन्न प्रतिदीप्ति प्रतिक्रिया उत्पादों की ज़रूरतों को पूरा कर सकते हैं।
इस प्रकार के प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का लाभ यह है कि दृश्य क्षेत्र समान रूप से प्रकाशित होता है, छवि स्पष्ट होती है, तथा आवर्धन जितना अधिक होता है, प्रतिदीप्ति उतनी ही मजबूत होती है।
ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप की मुख्य श्रेणियां क्या हैं?
1. साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप
साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप मुख्य रूप से निम्नलिखित भागों से बने होते हैं: रोशनी प्रणाली, जिसमें प्रकाश स्रोत और कंडेनसर शामिल होते हैं; ऑप्टिकल आवर्धन प्रणाली, जो ऑब्जेक्टिव लेंस और ऐपिस से बनी होती है। यह माइक्रोस्कोप का सबसे महत्वपूर्ण हिस्सा है और इसे अत्यधिक गोलाकार विपथन और रंगीन विपथन से बचने के लिए डिज़ाइन किया गया है, ऐपिस और ऑब्जेक्टिव लेंस दोनों जटिल लेंस समूहों से बने होते हैं।
2. लेजर कॉन्फोकल स्कैनिंग माइक्रोस्कोप
लेजर कन्फोकल स्कैनिंग माइक्रोस्कोप बहुत ही उच्च-स्तरीय और जटिल लगता है। वास्तव में, यह केवल लेजर को स्कैनिंग प्रकाश स्रोत के रूप में उपयोग करता है ताकि वस्तुओं को बिंदु दर बिंदु, रेखा दर रेखा और सतह दर सतह जल्दी से स्कैन और छवि बना सके।
लेजर बीम की छोटी तरंगदैर्ध्य के आधार पर, बीम स्वयं बहुत पतली होती है, जो यह निर्धारित करती है कि कॉन्फोकल लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप में उच्च रिज़ॉल्यूशन है, जो एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप से लगभग तीन गुना है। इस प्रकार के माइक्रोस्कोप का उपयोग कोशिका आकृति विज्ञान का निरीक्षण करने और इंट्रासेल्युलर जैव रासायनिक घटकों का मात्रात्मक विश्लेषण करने और कोशिका आकृति विज्ञान को मापने के लिए किया जाता है।
3. डार्क फील्ड माइक्रोस्कोप
डार्क-फील्ड माइक्रोस्कोप के कंडेनसर के केंद्र में एक प्रकाश प्लेट होती है, जो रोशनी के प्रकाश को सीधे ऑब्जेक्टिव लेंस में प्रवेश करने से रोकती है। केवल नमूने द्वारा परावर्तित और विवर्तित प्रकाश ही ऑब्जेक्टिव लेंस में प्रवेश कर सकता है। इसलिए, दृश्य क्षेत्र की पृष्ठभूमि काली होती है और वस्तुओं के किनारे चमकीले होते हैं।
