प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी को उनके ऑप्टिकल पथ के आधार पर दो प्रकारों में वर्गीकृत किया जाता है:

प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी को उनके ऑप्टिकल पथ के आधार पर दो प्रकारों में वर्गीकृत किया जाता है:

1. ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप: उत्तेजना प्रकाश स्रोत का उपयोग कंडेनसर लेंस के माध्यम से नमूना सामग्री से गुजरकर प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए किया जाता है। आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले डार्क फील्ड कंसंट्रेटर्स का भी उपयोग किया जा सकता है, और नमूने पर उत्तेजना प्रकाश को पुनर्निर्देशित और साइडलोब करने के लिए रिफ्लेक्टर को समायोजित करने के लिए साधारण कंसंट्रेटर्स का उपयोग किया जा सकता है। यह अपेक्षाकृत पुराने जमाने का प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी है। इसका लाभ कम आवर्धन पर मजबूत प्रतिदीप्ति है, लेकिन इसका नुकसान यह है कि बढ़ते आवर्धन के साथ इसकी प्रतिदीप्ति कम हो जाती है। इसलिए, बड़े नमूना सामग्रियों का अवलोकन करना बेहतर है।

2. गिरती हुई प्रकाश प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी आधुनिक समय में विकसित एक नए प्रकार की प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी है। उपरोक्त के विपरीत, उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस से नीचे की ओर नमूने की सतह पर गिरता है, प्रतिदीप्ति एकत्र करने के लिए रोशनी कंडेनसर और वस्तुनिष्ठ लेंस के समान वस्तुनिष्ठ लेंस का उपयोग करता है। ऑप्टिकल पथ में एक दोहरे रंग बीम स्प्लिटर को जोड़ने की आवश्यकता है, जो प्रकाश यूरेनियम से 45 डिग्री अलग है। कोण, उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस में परिलक्षित होता है और नमूने पर केंद्रित होता है। नमूने द्वारा उत्पन्न प्रतिदीप्ति, साथ ही उद्देश्य लेंस और कवर ग्लास की सतह से परावर्तित उत्तेजना प्रकाश, उद्देश्य लेंस में प्रवेश करती है और दोहरे रंग किरण विभाजक पर लौटती है, उत्तेजना प्रकाश और प्रतिदीप्ति को अलग करती है। फिर अवशिष्ट उत्तेजना प्रकाश को अवरोधक फिल्टर द्वारा अवशोषित कर लिया जाता है। यदि उत्तेजना फिल्टर/दोहरी रंग किरण विभाजक/अवरुद्ध फिल्टर के विभिन्न संयोजनों का उपयोग किया जाता है, तो वे विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रतिक्रिया उत्पादों की जरूरतों को पूरा कर सकते हैं। इस प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के फायदे समान क्षेत्र रोशनी, स्पष्ट इमेजिंग और बड़े आवर्धन के साथ मजबूत प्रतिदीप्ति हैं।

(2) प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करने के निर्देश
1. प्रकाश स्रोत चालू करें. इसकी अधिकतम चमक तक पहुंचने के लिए अल्ट्रा-हाई प्रेशर मरकरी लैंप को कुछ मिनटों के लिए पहले से गरम करने की आवश्यकता होती है।

2. ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के लिए लैंप स्रोत और कंडेनसर के बीच आवश्यक उत्तेजना फिल्टर और ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे संबंधित अवरोधक फिल्टर की स्थापना की आवश्यकता होती है। गिरती हुई प्रकाश प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप को ऑप्टिकल पथ के स्लॉट में आवश्यक उत्तेजना फ़िल्टर/दोहरी रंग बीम स्प्लिटर/अवरुद्ध फ़िल्टर ब्लॉक डालने की आवश्यकता होती है।

3. कम क्षमता वाले सूक्ष्मदर्शी से निरीक्षण करें और विभिन्न प्रकार के प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के समायोजन उपकरण के अनुसार प्रकाश स्रोत के केंद्र को समायोजित करें, ताकि यह संपूर्ण रोशनी वाले स्थान के केंद्र में स्थित हो।

4. नमूना रखें और अवलोकन के लिए उस पर ध्यान केंद्रित करें। उपयोग के दौरान ध्यान देना चाहिए: आंखों की क्षति से बचने के लिए फिल्टर स्थापित करने से पहले सीधे अपनी आंखों से न देखें; तेल माइक्रोस्कोप से नमूनों का अवलोकन करते समय, एक विशेष गैर फ्लोरोसेंट तेल माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाना चाहिए; उच्च दबाव वाले पारा लैंप को बंद करने के बाद, इसे तुरंत वापस चालू नहीं किया जा सकता है। इसे पुनः आरंभ करने में 5 मिनट लगते हैं, अन्यथा यह अस्थिर हो जाएगा और पारा लैंप के जीवनकाल को प्रभावित करेगा।

(3) एक नीले बैंगनी प्रकाश फिल्टर का उपयोग करके एक शिक्षण मंच पर एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत अवलोकन करने पर, 0.01% एक्रिडीन नारंगी फ्लोरोसेंट डाई से रंगी हुई कोशिकाओं को देखा जा सकता है। नाभिक और साइटोप्लाज्म प्रतिदीप्ति के दो अलग-अलग रंगों (गहरा हरा और नारंगी लाल) का उत्पादन करने के लिए उत्साहित होते हैं।