सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की प्रत्यक्ष गणना विधि
माइक्रोस्कोप के तहत सूक्ष्मजीवों की सीधे गिनती करने के लिए हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करना माइक्रोबियल गिनती के लिए आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली विधि है। इस पद्धति का लाभ इसकी सहजता और गति है। हेमोसाइटोमीटर स्लाइड और कवर स्लाइड के बीच गिनती कक्ष में उचित रूप से पतला जीवाणु निलंबन (या बीजाणु निलंबन) रखें, और माइक्रोस्कोप के नीचे गिनती करें। गिनती कक्ष के स्थिर आयतन (0.1मिमी2) के कारण, प्रति इकाई आयतन में सूक्ष्मजीवों की कुल संख्या को माइक्रोस्कोप के तहत देखे गए सूक्ष्मजीवों की संख्या के आधार पर परिवर्तित किया जा सकता है। इस तथ्य के कारण कि यह विधि जीवित और मृत जीवाणु कोशिकाओं के योग की गणना करती है, इसे कुल जीवाणु गणना विधि के रूप में भी जाना जाता है।
रक्त कोशिका गिनती प्लेट आमतौर पर एक विशेष रूप से डिजाइन की गई ग्लास स्लाइड होती है जिसमें चार खांचे होते हैं जो तीन प्लेटफॉर्म बनाते हैं। मध्य मंच को एक छोटे क्षैतिज खांचे द्वारा आधे में विभाजित किया गया है, और मंच के प्रत्येक किनारे पर एक ग्रिड उकेरा गया है। प्रत्येक ग्रिड को नौ बड़े वर्गों में विभाजित किया गया है, और बीच में बड़ा वर्ग गिनती कक्ष है, जहां माइक्रोबियल गिनती की जाती है। रक्त कोशिका गिनती प्लेट की संरचना चित्र VIII-1 में दिखाई गई है।
मतगणना कक्ष के पैमाने के लिए आम तौर पर दो विशिष्टताएँ होती हैं। एक यह है कि एक बड़े वर्ग को 16 मध्य वर्गों में विभाजित किया गया है, और प्रत्येक मध्य वर्ग को 25 छोटे वर्गों में विभाजित किया गया है (चित्र VIII -2); दूसरी विधि यह है कि एक बड़े वर्ग को 25 मध्य वर्गों में विभाजित किया जाए, और प्रत्येक मध्य वर्ग को 16 छोटे वर्गों में विभाजित किया जाए (चित्र VIII -1, C)। लेकिन काउंटिंग बोर्ड के आकार की परवाह किए बिना, प्रत्येक बड़े वर्ग में छोटे वर्गों की संख्या समान होती है, यानी 16 × 25=400 छोटे वर्ग, जैसा कि चित्र VIII-2 में दिखाया गया है।
यदि प्रत्येक बड़े वर्ग की भुजा की लंबाई 1 मिमी है, तो प्रत्येक बड़े वर्ग का क्षेत्रफल 1 मिमी2 है। कवर ग्लास से ढकने के बाद, स्लाइड और कवर ग्लास के बीच की ऊंचाई 0.1 मिमी है, इसलिए गिनती कक्ष का आयतन 0.1 मिमी 3 है।
गिनती करते समय, आमतौर पर पांच वर्गों में बैक्टीरिया की कुल संख्या की गणना की जाती है, और फिर प्रत्येक वर्ग का औसत मूल्य प्राप्त किया जाता है। इसे 16 या 25 से गुणा करने पर एक बड़े वर्ग में बैक्टीरिया की कुल संख्या प्राप्त होती है, जिसे बाद में 1 मिलीलीटर बैक्टीरिया समाधान में बैक्टीरिया की कुल संख्या में बदल दिया जाता है।
