सूक्ष्मजीव जनसंख्या का निर्धारण - प्रत्यक्ष सूक्ष्म गणना विधि!
I. उद्देश्य आवश्यकताएँ
1, हेमेटोक्रिट प्लेट गिनती के सिद्धांत को स्पष्ट करना।
2, हेमेटोक्रिट प्लेट का उपयोग करके माइक्रोबियल गिनती की विधि में महारत हासिल करें।
II. मूल सिद्धांत
माइक्रोस्कोप प्रत्यक्ष गिनती विधि एक परिभाषित क्षेत्र और मात्रा (जिसे जीवाणु काउंटर के रूप में भी जाना जाता है) के साथ एक विशेष स्लाइड पर परीक्षण किए जाने वाले नमूने की एक छोटी मात्रा को निलंबित करना है, माइक्रोस्कोप में सीधे गिनती एक सरल, तेज़, सहज विधि है। वर्तमान में, घरेलू और विदेशी आम तौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले जीवाणु काउंटर हैं: रक्त कोशिका गिनती प्लेट, पीटरऑफ-हौसर जीवाणु काउंटर और हॉक्सले जीवाणु काउंटर, आदि, जिनका उपयोग खमीर, बैक्टीरिया, मोल्ड बीजाणुओं और गिनती के अन्य निलंबन के लिए किया जा सकता है, मूल सिद्धांत समान है। बाद के दो प्रकार के काउंटरों में कवरस्लिप लगाने के बाद कुल मात्रा 0.02 मिमी 3 होती है, और कवरस्लिप और वाहक स्लाइस के बीच की दूरी केवल 0.02 मिमी होती है, इसलिए बैक्टीरिया जैसे छोटे कोशिकाओं को तेल विसर्जन उद्देश्य से देखा और गिना जा सकता है। इन काउंटरों के उपयोग के अलावा, माइक्रोस्कोप के नीचे सीधे देखे गए दृश्य क्षेत्र के लिए स्मीयर क्षेत्र के अनुपात का अनुमान लगाने की एक विधि भी है, जिसका उपयोग आम तौर पर गाय के दूध की जीवाणु संबंधी जांच के लिए किया जाता है। प्रत्यक्ष माइक्रोस्कोप गिनती विधि के लाभ सहज, तेज़ और संचालित करने में आसान हैं। हालाँकि, इस पद्धति का नुकसान यह है कि परिणाम आमतौर पर मृत और जीवित जीवों का योग होता है। इस नुकसान को दूर करने के लिए कुछ तरीके हैं, जैसे कि जीवित बैक्टीरिया को दागदार माइक्रोचैम्बर कल्चर (कम समय) और साइटोकाइनेसिस अवरोधकों को मिलाकर केवल जीवित जीवों की गिनती करने के उद्देश्य को प्राप्त करना।
संचालन चरण
1,बैक्टीरियल सस्पेंशन की तैयारी
उचित सांद्रता के साथ शराब बनाने वाले खमीर का जीवाणु निलंबन बनाने के लिए बाँझ खारा का उपयोग करें।
2, दर्पण गिनती कक्ष
नमूने जोड़ने से पहले, गिनती प्लेट के गिनती कक्ष का निरीक्षण किया जाना चाहिए। यदि कोई गंदगी है, तो गिनती से पहले इसे साफ और सूखा होना चाहिए।
3, नमूने जोड़ना
रक्त कोशिका गिनती प्लेट को साफ और सूखा कर कवरस्लिप से ढक दें, और फिर कवरस्लिप के किनारे से शराब बनाने वाले के खमीर निलंबन को हिलाने के लिए एक बाँझ केशिका ब्यूरेट का उपयोग करें ताकि एक छोटी बूंद को गिराने के लिए कवरस्लिप के किनारे से शराब बनाने वाले के खमीर निलंबन को हिलाया जा सके, ताकि केशिका प्रवेश द्वारा अंतराल के साथ जीवाणु तरल स्वचालित रूप से गिनती कक्ष में प्रवेश कर सके, आम तौर पर गिनती कक्ष जीवाणु तरल से भरा जा सकता है। नमूने लेते समय, जीवाणु समाधान को पहले अच्छी तरह से हिलाया जाना चाहिए; नमूने जोड़ते समय, गिनती कक्ष में हवा के बुलबुले नहीं होने चाहिए।
4, माइक्रोस्कोप गिनती
नमूना डालने के बाद उसे 5 मिनट के लिए आराम दें, फिर रक्त कोशिका गिनती की प्लेट को माइक्रोस्कोप वाहक चरण पर रखें, पहले कम आवर्धन के साथ गिनती कक्ष का स्थान ढूंढें, और फिर गिनती के लिए इसे उच्च आवर्धन में बदलें। माइक्रोस्कोप के प्रकाश की तीव्रता को उचित रूप से समायोजित करें, परावर्तक प्रकाश वाले माइक्रोस्कोप के लिए इस बात का भी ध्यान रखना चाहिए कि प्रकाश एक तरफ पक्षपाती न हो, अन्यथा देखने के क्षेत्र में गिनती कक्ष की ग्रिड लाइन को स्पष्ट करना आसान नहीं होगा, या केवल ऊर्ध्वाधर रेखा को देखना या केवल क्षैतिज रेखा को देखना आसान नहीं होगा। यदि गिनती से पहले जीवाणु तरल बहुत गाढ़ा या बहुत पतला पाया जाता है, तो गिनती से पहले कमजोर पड़ने को फिर से समायोजित करना आवश्यक है। प्रत्येक कोशिका में लगभग 5 से 10 बैक्टीरिया की सामान्य नमूना कमजोर पड़ने की आवश्यकताएं उपयुक्त हैं यीस्ट बडिंग के मामले में, जब बडिंग बॉडी मदर सेल के आधे आकार तक पहुँच जाती है, तो इसे दो जीवों के रूप में गिना जाता है। नमूने की बैक्टीरिया सामग्री की गणना करने के लिए औसत मूल्य में दो गिनती कक्षों से एक नमूना गिनना।
5. हेमेटोक्रिट प्लेट की सफाई
उपयोग के बाद, नल के नीचे पानी से रक्त कोशिका गिनती प्लेट को धो लें, धोने और ब्रश करने के लिए कठोर वस्तुओं का उपयोग न करें, इसे स्वयं सुखाएँ या धोने के बाद इसे सुखाने के लिए हेयर ड्रायर का उपयोग करें। सूक्ष्म रूप से प्लेट का निरीक्षण करें कि क्या प्रत्येक डिब्बे में कोई अवशिष्ट जीव या अन्य अवक्षेप हैं। यदि यह साफ नहीं है, तो इसे तब तक धोना चाहिए जब तक यह साफ न हो जाए।
