प्रतिदीप्ति कुल आंतरिक परावर्तन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का अनुप्रयोग
टीआईआरएफएम (कुल आंतरिक परावर्तन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप), कुल आंतरिक परावर्तन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप, जब प्रकाश एक उच्च अपवर्तक सूचकांक वाले माध्यम से कम अपवर्तक सूचकांक वाले माध्यम में प्रवेश करता है, यदि घटना कोण काफी बड़ा है, तो सभी प्रकाश अपवर्तन के बिना परिलक्षित होता है, लेकिन दो मीडिया के इंटरफ़ेस में वाष्पशील तरंगें उत्पन्न होती हैं जो वस्तु की सतह के अवलोकन का एहसास करने के लिए इंटरफ़ेस के पास 100nm के भीतर प्रतिदीप्ति को उत्तेजित कर सकती हैं। उत्तेजना प्रकाश को एक पारंपरिक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप या एक विशेष प्रकाशक के माध्यम से भेजा जा सकता है, और लेजर के घटना कोण को नियंत्रित किया जा सकता है। उत्तेजना प्रकाश को डिटेक्टर में प्रवेश करने से रोकने के लिए तात्कालिक क्षेत्र उत्तेजना विधि का उपयोग किया जाता है। कांच और पानी के बीच इंटरफेस पर उत्तेजना प्रकाश प्रतिबिंब द्वारा पूर्ण आंतरिक कार्यान्वयन उत्पन्न करता है। उत्तेजना प्रकाश के घातीय क्षीणन के कारण, कुल प्रतिबिंब सतह के बहुत करीब का नमूना क्षेत्र ही प्रतिदीप्ति प्रतिबिंब उत्पन्न करेगा, जो अवलोकन लक्ष्य पर पृष्ठभूमि प्रकाश शोर के हस्तक्षेप को बहुत कम कर देता है, इसलिए इस तकनीक का व्यापक रूप से गतिशील अवलोकन में उपयोग किया जाता है कोशिका सतह पदार्थों का.
कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी (TIRFM) का योजनाबद्ध आरेख
①नमूना ②इवानसेंट वेव रेंज ③कवर ग्लास ④तेल विसर्जन ⑤लक्ष्य ⑥उत्सर्जन किरण (सिग्नल) ⑦उत्तेजना किरण
पूर्ण आंतरिक परावर्तन प्राप्त करने के लिए, एक बड़े आपतित कोण की आवश्यकता होती है, उदाहरण के लिए, ग्लास-पानी इंटरफ़ेस पर आपतित कोण 61 डिग्री से अधिक होता है। इसे एक प्रिज्म द्वारा प्राप्त किया जा सकता है, जिसे प्रिज्म-आधारित टीआईआरएफएम कहा जाता है, या उच्च संख्यात्मक एपर्चर वाले एक ऑब्जेक्टिव लेंस द्वारा, जिसे ऑब्जेक्टिव-प्रकार टीआईआरएफएम कहा जाता है। वर्तमान व्यावसायीकृत कुल आंतरिक परावर्तन प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी आम तौर पर उच्च गति और उच्च परिशुद्धता वाले वस्तुनिष्ठ लेंस प्रकार के होते हैं।
कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग कुछ जैविक क्षेत्रों में व्यापक रूप से किया जाता है क्योंकि यह वस्तुओं की सतह पर बहुत पतली सीमा (100 एनएम से कम) में प्रतिदीप्ति अवलोकन का एहसास कर सकता है। जैसे कि निम्नलिखित अनुप्रयोग:
कोशिका सतह छवियों का अवलोकन: कोशिका झिल्ली सतह संरचना, कोशिका सतह संपर्क, झिल्ली सतह गतिशीलता/प्रोटीन स्थानीयकरण।
एकल-अणु अवलोकन और हेरफेर: मायोसिन, एक्टिन, और Cy3-लेबल एटीपी।
कोशिका झिल्ली की सतह की गति: जैसे कि पुटिका का समावेश, पुटिका का साँस छोड़ना, और पुटिका का बहिःस्रावी होना।
कोशिका झिल्ली में कैल्शियम स्पार्किंग घटना का अवलोकन, आयन चैनल की निगरानी।
आणविक मोटर अनुसंधान: घूर्णी मोटर्स, साइटोस्केलेटल प्रोटीन, पॉलिमर, जी प्रोटीन, रिंग प्रोटीन, न्यूक्लियोटाइड मोटर्स।
जीव विज्ञान के क्षेत्र के अलावा, रासायनिक आणविक संरचनाओं के अवलोकन के लिए रसायन विज्ञान के क्षेत्र में भी इसका अच्छा अनुप्रयोग है।
