मल्टीफोटोन लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप के फायदे और सीमाएं
① उत्तेजना लाल या अवरक्त प्रकाश के साथ की जाती है, जिसके परिणामस्वरूप कम प्रकाश प्रकीर्णन होता है। छोटे कणों द्वारा प्रकीर्णन तरंग दैर्ध्य की चौथी शक्ति के व्युत्क्रमानुपाती होता है।
② पिनहोल के बिना, इमेजिंग विमान से अधिक बिखरे हुए फोटॉन एकत्र किए जा सकते हैं।
③ पिनहोल आउट-ऑफ-फोकस क्षेत्रों या फोकल बिंदु से उत्सर्जित बिखरे हुए फोटॉन को अलग नहीं कर सकते हैं। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी गहरे ऊतक इमेजिंग के लिए अच्छा सिग्नल-टू-शोर अनुपात प्रदान करता है।
④ एकल-फोटॉन उत्तेजना में उपयोग की जाने वाली पराबैंगनी या दृश्य प्रकाश किरण के फोकल विमान तक पहुंचने से पहले नमूने द्वारा अवशोषित और क्षीण हो जाती है, जिससे गहरी-परत उत्तेजना मुश्किल हो जाती है।
⑤ जैविक सूक्ष्म अवलोकन के लिए, प्राथमिक विचार नमूनों की जैविक गतिविधि को संरक्षित करना, पानी की मात्रा, आयन एकाग्रता और ऑक्सीजन और पोषक तत्वों के परिसंचरण को बनाए रखना है। ऑप्टिकल अवलोकन के लिए, गर्मी और फोटॉन ऊर्जा दोनों को विकिरण स्तर के भीतर रखा जाना चाहिए जो कोशिकाओं को नुकसान न पहुंचाए।
⑥ मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप के कई फायदे हैं। 3डी रिज़ॉल्यूशन, गहरी पैठ, प्रकीर्णन दक्षता, पृष्ठभूमि प्रकाश, सिग्नल-टू-शोर अनुपात और नियंत्रणीयता के संदर्भ में, वे बेहतर गुण प्रदर्शित करते हैं जो पारंपरिक लेजर माइक्रोस्कोप मेल नहीं खा सकते हैं या हासिल नहीं कर सकते हैं।
मल्टीफोटोन लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप के नुकसान
① यह केवल प्रतिदीप्ति इमेजिंग कर सकता है।
② यदि नमूने में क्रोमोफोर्स हैं जो उत्तेजना प्रकाश को अवशोषित करते हैं, तो नमूने को थर्मल क्षति हो सकती है।
③ रिज़ॉल्यूशन थोड़ा कम हो गया है। यद्यपि इसे एक साथ कॉन्फोकल पिनहोल का उपयोग करके सुधारा जा सकता है, सिग्नल हानि होगी।
④ महंगे अल्ट्राफास्ट लेजर द्वारा प्रतिबंधित, मल्टीफोटोन स्कैनिंग माइक्रोस्कोप की लागत अपेक्षाकृत अधिक है।
