लेजर स्कैनिंग मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी के लाभ बढ़ाए गए
लेजर स्कैनिंग मल्टी-फोटोन माइक्रोस्कोप ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी में एक बड़ा सुधार है, मुख्य रूप से जीवित और स्थिर कोशिकाओं और ऊतकों की गहरी संरचना का निरीक्षण करने और स्पष्ट और तेज बहुपरत जेड-प्लेन संरचनाएं प्राप्त करने की क्षमता में, यानी ऑप्टिकल स्लाइस, जिससे नमूने की एक त्रि-आयामी ठोस संरचना का निर्माण किया जा सकता है। कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी एक लेजर प्रकाश स्रोत का उपयोग करता है जो उद्देश्य लेंस के पूरे पीछे के फोकल प्लेन को भरने के लिए विस्तारित होता है, और फिर नमूने के फोकल प्लेन पर बहुत छोटे धब्बों में परिवर्तित होने के लिए उद्देश्य लेंस की लेंस प्रणाली से गुजरता है। उद्देश्य लेंस के संख्यात्मक एपर्चर के आधार पर, उज्ज्वल रोशनी बिंदु व्यास का आकार लगभग 0.25 ~ 0.8 माइक्रोन है और गहराई लगभग 0.5 ~ 1.5 माइक्रोन है। कॉन्फोकल बिंदु का आकार माइक्रोस्कोप डिज़ाइन, लेजर तरंग दैर्ध्य, उद्देश्य लेंस की विशेषताओं, स्कैनिंग इकाई की स्थिति सेटिंग और नमूने की प्रकृति द्वारा निर्धारित किया जाता है। फील्ड माइक्रोस्कोप में रोशनी की एक बड़ी रेंज और रोशनी की गहराई होती है, जबकि कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप रोशनी को फोकल प्लेन पर एक ही फोकल पॉइंट पर केंद्रित करते हैं। कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप का सबसे बुनियादी लाभ मोटे फ्लोरोसेंट नमूनों (50 μm या उससे अधिक) के बारीक ऑप्टिकल सेक्शन बनाने की क्षमता है, जिसमें सेक्शन की मोटाई लगभग 0.5 से 1.5 μm होती है। माइक्रोस्कोप के Z-अक्ष स्टेपर मोटर के साथ नमूने को ऊपर और नीचे ले जाकर ऑप्टिकल सेक्शन इमेज की एक श्रृंखला प्राप्त की जा सकती है। छवि जानकारी का अधिग्रहण पहले प्लेन में नियंत्रित होता है और नमूने पर अन्य स्थानों से उत्सर्जित संकेतों से बाधित नहीं होता है। बैकग्राउंड फ्लोरोसेंस के प्रभावों को हटाने और सिग्नल-टू-शोर अनुपात को बढ़ाने के बाद, पारंपरिक फील्ड-इलुमिनेटेड फ्लोरोसेंस इमेज की तुलना में कॉन्फोकल इमेज का कंट्रास्ट और रिज़ॉल्यूशन काफी बेहतर हो जाता है। कई नमूनों में, कई जटिल संरचनात्मक घटक जटिल सिस्टम बनाने के लिए आपस में जुड़ते हैं, लेकिन एक बार पर्याप्त ऑप्टिकल सेक्शन प्राप्त हो जाने के बाद, हम उन्हें सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके तीन आयामों में फिर से बना सकते हैं। इस प्रयोगात्मक विधि का उपयोग जैविक अनुसंधान में कोशिकाओं या ऊतकों के बीच जटिल संरचनात्मक और कार्यात्मक संबंधों को स्पष्ट करने के लिए व्यापक रूप से किया गया है।
