फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी, कॉन्फोकल लेजर माइक्रोस्कोपी से किस प्रकार भिन्न है
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी
1. प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग प्रकाश स्रोत के रूप में करता है ताकि निरीक्षण की जा रही वस्तु को प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए प्रकाशित किया जा सके, और फिर माइक्रोस्कोप के नीचे वस्तु के आकार और स्थान का निरीक्षण किया जा सके। प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का उपयोग कोशिकाओं के भीतर पदार्थों के अवशोषण और परिवहन के साथ-साथ रासायनिक पदार्थों के वितरण और स्थिति का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। कोशिकाओं में कुछ पदार्थ, जैसे क्लोरोफिल, पराबैंगनी किरणों द्वारा विकिरणित होने के बाद प्रतिदीप्ति कर सकते हैं; कुछ पदार्थ स्वयं प्रतिदीप्ति नहीं कर सकते हैं, लेकिन यदि उन्हें फ्लोरोसेंट रंगों या फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी से रंगा जाता है, तो वे पराबैंगनी किरणों के साथ विकिरण के बाद प्रतिदीप्ति कर सकते हैं। प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी ऐसे पदार्थों पर गुणात्मक और मात्रात्मक शोध के लिए उपकरणों में से एक है।
2. प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का सिद्धांत:
(ए) प्रकाश स्रोत: प्रकाश स्रोत विभिन्न तरंगदैर्ध्य (पराबैंगनी से अवरक्त तक) का प्रकाश विकीर्ण करता है।
(बी) उत्तेजना फिल्टर प्रकाश स्रोत: एक विशिष्ट तरंगदैर्ध्य का प्रकाश संचारित करता है जो नमूने को प्रतिदीप्तिमान बना सकता है, जबकि उस प्रकाश को अवरुद्ध करता है जो प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए बेकार है।
(सी) फ्लोरोसेंट नमूने: आमतौर पर फ्लोरोसेंट रंगद्रव्य के साथ अभिरंजित।
(डी) ब्लॉकिंग फ़िल्टर: नमूने द्वारा अवशोषित न होने वाले उत्तेजक प्रकाश को रोकता है और चुनिंदा रूप से प्रतिदीप्ति संचारित करता है। प्रतिदीप्ति में कुछ तरंगदैर्ध्य भी चुनिंदा रूप से संचारित होते हैं। एक माइक्रोस्कोप जो प्रकाशित वस्तु को प्रतिदीप्ति करने के लिए प्रकाश स्रोत के रूप में पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग करता है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप को पहली बार 1931 में बर्लिन, जर्मनी में नॉर और हैलोव्स्का द्वारा इकट्ठा किया गया था। यह माइक्रोस्कोप प्रकाश किरण के बजाय एक उच्च गति वाले इलेक्ट्रॉन बीम का उपयोग करता है। चूँकि इलेक्ट्रॉन प्रवाह की तरंगदैर्ध्य प्रकाश की तुलना में बहुत कम होती है, इसलिए इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का आवर्धन 800,000 गुना तक पहुँच सकता है, और न्यूनतम रिज़ॉल्यूशन सीमा 0.2 नैनोमीटर है। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप, जिसका उपयोग 1963 में शुरू हुआ, लोगों को वस्तुओं की सतह पर छोटी संरचनाओं को देखने की अनुमति देता है।
3. अनुप्रयोग क्षेत्र: छोटी वस्तुओं की छवियों को बड़ा करने के लिए उपयोग किया जाता है। आम तौर पर जीव विज्ञान, चिकित्सा, सूक्ष्म कणों आदि के अवलोकन में उपयोग किया जाता है।
कोंफोकल माइक्रोस्कोप
1. कॉन्फ़ोकल माइक्रोस्कोप परावर्तित प्रकाश के ऑप्टिकल पथ में एक अर्ध-परावर्तक अर्ध-लेंस जोड़ता है, जो लेंस से गुज़रे परावर्तित प्रकाश को अन्य दिशाओं में अपवर्तित करता है। इसके फ़ोकस पर एक पिनहोल के साथ एक बैफल होता है, और पिनहोल फ़ोकल पॉइंट पर स्थित होता है, बैफल के पीछे, एक फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब होती है। यह कल्पना की जा सकती है कि डिटेक्शन लाइट फ़ोकस से पहले और बाद में परावर्तित प्रकाश इस कॉन्फ़ोकल सिस्टम से होकर गुजरता है और छोटे छेद पर फ़ोकस नहीं किया जा सकता है, और बैफल द्वारा अवरुद्ध हो जाएगा। तो फ़ोटोमीटर जो मापता है वह फ़ोकस पर परावर्तित प्रकाश की तीव्रता है।
2. सिद्धांत: पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप क्षेत्र प्रकाश स्रोतों का उपयोग करते हैं, और नमूने पर प्रत्येक बिंदु की छवि आसन्न बिंदुओं से विवर्तन या बिखरे हुए प्रकाश द्वारा बाधित होगी; लेजर स्कैनिंग कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप नमूने के अंदरूनी हिस्से को रोशन करने के लिए रोशन पिनहोल के माध्यम से बिंदु प्रकाश स्रोतों को बनाने के लिए लेजर बीम का उपयोग करते हैं। फोकल प्लेन के प्रत्येक बिंदु को स्कैन किया जाता है, और नमूने पर प्रबुद्ध बिंदु का पता लगाने वाले पिनहोल पर चित्रण किया जाता है, जिसे डिटेक्शन पिनहोल के पीछे फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब (PMT) या कोल्ड कपलिंग डिवाइस (cCCD) द्वारा बिंदु दर बिंदु या रेखा दर रेखा प्राप्त किया जाता है, और जल्दी से कंप्यूटर मॉनीटर स्क्रीन पर एक फ्लोरोसेंट छवि बनती है। रोशनी पिनहोल और डिटेक्शन पिनहोल ऑब्जेक्टिव लेंस फोकल प्लेन के सापेक्ष संयुग्मित होते हैं। फोकल प्लेन पर बिंदु एक ही समय में रोशनी पिनहोल और उत्सर्जन पिनहोल पर केंद्रित होते हैं। फोकल प्लेन के बाहर के बिंदुओं का पता लगाने वाले पिनहोल पर चित्रण नहीं किया जाएगा। यह प्राप्त किया जाता है कॉन्फोकल छवियां नमूनों के ऑप्टिकल क्रॉस-सेक्शन हैं, जो साधारण माइक्रोस्कोप में धुंधली छवियों की कमियों को दूर करती हैं।
3. अनुप्रयोग क्षेत्र: चिकित्सा, पशु और पौधे वैज्ञानिक अनुसंधान, जैव रसायन, जीवाणु विज्ञान, कोशिका जीव विज्ञान, ऊतक भ्रूण विज्ञान, खाद्य विज्ञान, आनुवंशिकी, औषध विज्ञान, शरीर विज्ञान, प्रकाशिकी, विकृति विज्ञान, वनस्पति विज्ञान, तंत्रिका विज्ञान, समुद्री जीव विज्ञान, और सामग्री विज्ञान, इलेक्ट्रॉनिक विज्ञान, यांत्रिकी, पेट्रोलियम भूविज्ञान, खनिज विज्ञान।
