सूक्ष्मजीवी कोशिकाओं का आकार देखने के लिए किस प्रकार के सूक्ष्मदर्शी का प्रयोग किया जाता है?
सभी छोटे जीवों के लिए एक सामूहिक शब्द जिन्हें व्यक्तियों के लिए नग्न आंखों से देखना मुश्किल होता है। सूक्ष्मजीवों में बैक्टीरिया, वायरस, कवक और कुछ शैवाल शामिल हैं। (हालांकि, कुछ सूक्ष्मजीव नग्न आंखों को दिखाई देते हैं, जैसे कवक से संबंधित मशरूम, गैनोडर्मा ल्यूसिडम, आदि) वायरस एक प्रकार के "गैर-सेलुलर जीव" हैं जो न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन जैसे कुछ घटकों से बने होते हैं, लेकिन उनके अस्तित्व जीवित कोशिकाओं पर निर्भर होना चाहिए। मौजूद विभिन्न वातावरणों के अनुसार, उन्हें प्रोकैरियोटिक सूक्ष्मजीवों, अंतरिक्ष सूक्ष्मजीवों, कवक सूक्ष्मजीवों, खमीर सूक्ष्मजीवों, समुद्री सूक्ष्मजीवों आदि में विभाजित किया जा सकता है।
सूक्ष्मजीवों की भूमिका और हानि:
मनुष्यों पर सूक्ष्मजीवों का सबसे महत्वपूर्ण प्रभाव संक्रामक रोगों का प्रसार है। मनुष्य की 50 प्रतिशत बीमारियाँ वायरस के कारण होती हैं। मानव रोग उत्पन्न करने वाले रोगाणुओं का इतिहास उनके साथ मानव के निरंतर संघर्ष का इतिहास है। मनुष्य ने बीमारियों की रोकथाम और उपचार में काफी प्रगति की है, लेकिन नए और फिर से उभरने वाले सूक्ष्मजीव संक्रमण होते रहते हैं, जैसे बड़ी संख्या में वायरल बीमारियाँ जिनमें प्रभावी चिकित्सीय दवाओं का अभाव है। कुछ रोगों का रोगजनक तंत्र स्पष्ट नहीं है। बड़ी संख्या में व्यापक-स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक दवाओं के दुरुपयोग ने मजबूत चयन दबाव पैदा कर दिया है, जिससे कई उपभेदों में उत्परिवर्तन हुआ है, जिससे दवा प्रतिरोध का उदय हुआ है, और मानव स्वास्थ्य को नए खतरों से खतरा है। कुछ खंडित वायरस पुनर्संयोजन या पुनर्संयोजन के माध्यम से उत्परिवर्तित हो सकते हैं। सबसे विशिष्ट उदाहरण इन्फ्लूएंजा वायरस है।
सूक्ष्मजीवों की विशिष्ट परिभाषा जानने के बाद, प्रयोगकर्ता को सूक्ष्मजीवों को देखने के लिए अध्ययन करते समय किस प्रकार के माइक्रोस्कोप का उपयोग करना चाहिए, और बेहतर देखने के लिए, और सामान्य माइक्रोबियल रूपों का निरीक्षण और विश्लेषण करने के लिए किस माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जा सकता है।
माइक्रोस्कोप का आविष्कार मुस्कुराती हुई वस्तुओं को देखने में सक्षम होना है जिन्हें नग्न आंखों से नहीं देखा जा सकता है। सूक्ष्मजीवों का आकार बहुत छोटा होता है इसलिए इन्हें माइक्रोस्कोप की सहायता से बड़ा करके देखना चाहिए। इसके अलावा, कई प्रकार के सूक्ष्मजीव होते हैं, इसलिए मूल रूप से अधिकांश ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप सूक्ष्मजीवों का निरीक्षण कर सकते हैं, अगला सवाल यह है कि सूक्ष्मजीवों के अवलोकन और विश्लेषण के लिए किस प्रकार के माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाना चाहिए। माइक्रोबियल आकृति विज्ञान अवलोकन के लिए सामान्य सूक्ष्मदर्शी में जैविक सूक्ष्मदर्शी, चरण कंट्रास्ट सूक्ष्मदर्शी, उल्टे सूक्ष्मदर्शी, प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और कन्फोकल सूक्ष्मदर्शी शामिल हैं। माइक्रोस्कोप वगैरह.
निम्नलिखित सूक्ष्मजीवों का निरीक्षण करने के लिए उपयोग किए जाने वाले विभिन्न सूक्ष्मदर्शी का वर्णन करता है:
1. साधारण प्रकाश सूक्ष्मदर्शी
प्राकृतिक प्रकाश या प्रकाश का उपयोग प्रकाश स्रोत के रूप में किया जाता है, और इसकी तरंग दैर्ध्य लगभग {{0}}.4 μm होती है। माइक्रोस्कोप का रिज़ॉल्यूशन तरंग दैर्ध्य का आधा है, यानी, 0.2 μm, और नग्न आंखों को दिखाई देने वाली सबसे छोटी छवि 0.2 मिमी है। इसलिए, एक तेल (विसर्जन) दर्पण का उपयोग करके 1000 बार बड़ा करने से 0.2μm कणों को नग्न आंखों से दिखाई देने वाले 0.2 मिमी में बढ़ाया जा सकता है। साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग बैक्टीरिया, एक्टिनोमाइसेट्स और कवक के अवलोकन के लिए किया जा सकता है।
2. डार्कफील्ड माइक्रोस्कोपी का उपयोग आमतौर पर दाग रहित माइक्रोबियल आकृति विज्ञान और गति का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है। साधारण माइक्रोस्कोप में डार्क फील्ड कंडेनसर स्थापित होने के बाद, प्रकाश सीधे मध्य से प्रवेश नहीं कर सकता है, और देखने का क्षेत्र अंधेरा है। जब नमूना कंडेनसर के किनारे से तिरछी रोशनी प्राप्त करता है, तो यह बिखर सकता है, इसलिए अंधेरे क्षेत्र की पृष्ठभूमि में बैक्टीरिया या स्पाइरोकेट्स जैसे उज्ज्वल सूक्ष्मजीवों को देखा जा सकता है।
3. चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप प्रकाश चरण और प्रत्यक्ष प्रकाश के आयाम को बदलने के लिए चरण अंतर प्लेट के प्रकाश प्रभाव का उपयोग करता है, और प्रकाश चरण के अंतर को प्रकाश तीव्रता अंतर में परिवर्तित करता है। एक चरण-विपरीत माइक्रोस्कोप के तहत, जब प्रकाश एक दाग रहित नमूने से गुजरता है, तो प्रकाश चरण में अंतर नमूने के विभिन्न भागों के घनत्व की असंगतता के कारण होता है, और सूक्ष्मजीवों की आकृति विज्ञान, आंतरिक संरचना और आंदोलन मोड को देखा जा सकता है।
4. प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप मूल रूप से साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के समान है, मुख्य अंतर प्रकाश स्रोत, फिल्टर और कंडेनसर है। वर्तमान में, उनमें से अधिकांश एपि-लाइट उपकरणों का उपयोग करते हैं, और उच्च दबाव वाले पारा लैंप का उपयोग आमतौर पर प्रकाश स्रोतों के रूप में किया जाता है, जो पराबैंगनी या नीले-बैंगनी प्रकाश का उत्सर्जन कर सकते हैं। फ़िल्टर दो प्रकार के होते हैं: उत्तेजना फ़िल्टर और अवशोषण फ़िल्टर। सामान्य उज्ज्वल-क्षेत्र कंडेनसर के अलावा, प्रतिदीप्ति और पृष्ठभूमि के बीच अंतर को बढ़ाने के लिए नीली रोशनी का उपयोग करके प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में डार्क-फील्ड कंडेनसर का भी उपयोग किया जा सकता है। यह विधि फ्लोरोसेंट पिगमेंट से सने या फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ संयुक्त बैक्टीरिया का पता लगाने या पहचान करने के लिए लागू है।
5. इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी प्रकाश स्रोत के रूप में इलेक्ट्रॉन प्रवाह का उपयोग करते हैं। दृश्य प्रकाश की तुलना में, तरंग दैर्ध्य हजारों गुना भिन्न होता है, जो रिज़ॉल्यूशन में काफी सुधार करता है। चुंबकीय कुंडल का उपयोग ऑप्टिकल प्रवर्धन प्रणाली के रूप में किया जाता है, और आवर्धन दसियों हज़ार या सैकड़ों हज़ार गुना तक पहुंच सकता है। इसका उपयोग अक्सर वायरस कणों में किया जाता है। और जीवाणु अल्ट्रास्ट्रक्चर का अवलोकन।
दागरहित माइक्रोबियल नमूनों का अवलोकन:
बिना दाग वाले नमूनों का उपयोग आम तौर पर बैक्टीरिया की आकृति विज्ञान, शक्ति और गति का निरीक्षण करने के लिए किया जा सकता है। दाग रहित होने पर बैक्टीरिया रंगहीन और पारदर्शी होते हैं, और इन्हें माइक्रोस्कोप के नीचे मुख्य रूप से बैक्टीरिया और आसपास के वातावरण के अपवर्तक सूचकांक के बीच अंतर से देखा जाता है। फ्लैगेल्ला वाले बैक्टीरिया तेजी से चलते हैं, जबकि फ्लैगेल्ला के बिना बैक्टीरिया अनियमित ब्राउनियन गति दिखाते हैं। ट्रेपोनेमा पैलिडम, लेप्टोस्पाइरा और कैम्पिलोबैक्टर जैसे व्यवहार्य जीवाणुओं के विशिष्ट आकार और गति पैटर्न होते हैं, जो नैदानिक महत्व के होते हैं। आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली विधियाँ दबाव ड्रॉप विधि, पेंडेंट ड्रॉप विधि और केशिका विधि हैं।
1. हैंगिंग ड्रॉप विधि साफ अवतल ग्लास स्लाइड के अवतल छेद के चारों ओर वैसलीन लगाएं, इनोक्यूलेशन लूप के साथ बैक्टीरियल सस्पेंशन की एक अंगूठी लें और इसे कवर ग्लास के केंद्र में रखें, फिर अवतल ग्लास स्लाइड के अवतल छेद को संरेखित करें कवर ग्लास के केंद्र में बूंद डालें और कवर लगाएं, फिर इसे जल्दी से पलट दें, कवर स्लिप को हल्के से दबाएं ताकि यह अवतल छेद के किनारे पर वैसलीन से कसकर चिपक जाए, और फिर एक उच्च-शक्ति के नीचे निरीक्षण करें माइक्रोस्कोप (या डार्क फील्ड)।
2. इनोक्यूलेशन लूप के साथ बैक्टीरियल सस्पेंशन की एक अंगूठी लें और इसे प्रेशर ड्रॉप विधि द्वारा एक साफ ग्लास स्लाइड के केंद्र में रखें, और हवा के बुलबुले की उत्पत्ति से बचने और रोकथाम का ध्यान रखते हुए बैक्टीरिया सस्पेंशन को धीरे से एक कवर ग्लास से ढक दें। अतिप्रवाह से जीवाणु निलंबन। हाई-पावर लेंस के तहत ब्राइटफील्ड (या डार्कफील्ड) अवलोकन।
3. केशिका विधि का उपयोग मुख्य रूप से अवायवीय जीवाणुओं की गतिकी की जांच के लिए किया जाता है। आमतौर पर 60~70मिमी लंबा चुनें। 0.5-1.0 मिमी के छिद्र वाली केशिका के माध्यम से अवायवीय जीवाणु निलंबन को साइफन करने के बाद, केशिका के दोनों सिरों को लौ से सील करें। केशिका को प्लास्टिक पेपर के साथ ग्लास स्लाइड पर तय किया गया था, और अंधेरे क्षेत्र में एक उच्च-शक्ति लेंस के नीचे देखा गया था।
माइक्रोस्कोप से दागदार माइक्रोबियल नमूनों का अवलोकन:
बैक्टीरिया के नमूने के दागदार हो जाने के बाद, बैक्टीरिया और आसपास के वातावरण के बीच रंग में तीव्र अंतर के कारण, बैक्टीरिया की रूपात्मक विशेषताएं (जैसे आकार, आकृति, व्यवस्था, आदि) बैक्टीरिया और कुछ विशेष संरचनाओं की हो सकती हैं। एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप (जैसे कैप्सूल, फ्लैगेल्ला, बीजाणु, आदि) के तहत स्पष्ट रूप से देखा जाता है, और बैक्टीरिया को धुंधला प्रतिक्रियाशीलता के अनुसार वर्गीकृत और पहचाना जा सकता है।
(1) बैक्टीरियल स्टेनिंग की सामान्य प्रक्रिया बैक्टीरियल स्टेनिंग की सामान्य प्रक्रिया है: स्मीयर (सूखना) - फिक्सेशन - स्टेनिंग।
1. रक्त, स्राव, उत्सर्जन, पंचर तरल पदार्थ और तरल संस्कृति की स्मीयर तैयारी, और कांच की स्लाइडों पर सीधे पतली फिल्म स्मीयर; शव परीक्षण या संक्रमित जानवर के ऊतकों का नमूना लेने के लिए घाव पर रुई के फाहे से धब्बा लगाएं। ठोस माध्यम पर जीवाणु कालोनियों या लॉन की तैयारी के लिए, पहले एक इनोक्यूलेशन लूप का उपयोग करके सामान्य लवण की एक रिंग लें और इसे स्लाइड के केंद्र में रखें, फिर थोड़ी मात्रा में कल्चर लेने और इसे पीसने के लिए एक स्टेराइल इनोक्यूलेशन लूप का उपयोग करें। समान रूप से सामान्य नमकीन में, और इसे 1 सेमी2 बड़ी या छोटी चित्रित सतहों पर फैलाएं, इसे कमरे के तापमान पर स्वाभाविक रूप से सूखने दें या कुछ दूरी पर धीरे-धीरे सूखने दें।
2. निर्धारण का उद्देश्य बैक्टीरिया को मारना, बैक्टीरिया के प्रोटीन और संरचना को जमाना और धुंधला होने की सुविधा प्रदान करना है; धोने के दौरान पानी से धुलने से बचने के लिए बैक्टीरिया को स्लाइड पर चिपकाने के लिए बढ़ावा देना; बैक्टीरिया की पारगम्यता को रंगों में बदलें, जो धुंधला होने वाले बैक्टीरिया कोशिकाओं की संरचना के लिए फायदेमंद है। इसे आम तौर पर लौ से गर्म करके ठीक किया जाता है, और सूखे स्मीयर को जल्दी से 3 बार लौ के माध्यम से गुजारा जाता है। बेहतर होगा कि स्लाइड को छूने पर हाथ के पिछले हिस्से की त्वचा न जले।
3. रंगाई अलग-अलग निरीक्षण उद्देश्यों के अनुसार, रंगाई के लिए अलग-अलग रंगाई विधियां चुनें। रंगाई करते समय, कवरेज बढ़ाने के लिए डाई का घोल बूंद-बूंद करके डालें।
4. मोर्डेंट कोई भी पदार्थ जो डाई और रंगी हुई वस्तु के बीच संबंध को बढ़ा सकता है, रंगी हुई वस्तु पर डाई को स्थिर कर सकता है और कोशिका झिल्ली की पारगम्यता में परिवर्तन का कारण बन सकता है, उसे मोर्डेंट कहा जाता है। आमतौर पर फिटकरी, टैनिक एसिड, धातु लवण और आयोडीन आदि का उपयोग किया जाता है, और रंग को बढ़ावा देने के लिए हीटिंग का भी उपयोग किया जाता है। मोर्डेंट का उपयोग प्राथमिक स्टेनिंग और काउंटरस्टेनिंग के बीच किया जा सकता है, और फिक्सेशन के बाद भी इसका उपयोग किया जा सकता है या फिक्सेटिव और स्टेनिंग में शामिल किया जा सकता है।
5. रंगहीन करना कोई भी रासायनिक एजेंट जो रंगी हुई वस्तु का रंग हटा सकता है उसे रंगहीन करने वाला कहा जाता है। इथेनॉल, एसीटोन आदि का उपयोग आमतौर पर डीकोलोराइज़र के रूप में किया जाता है। रंग हटानेवाला एजेंट बैक्टीरिया और रंगों के संयोजन की स्थिरता की डिग्री का पता लगा सकता है, जिसका उपयोग विभेदक धुंधलापन के लिए किया जा सकता है।
6. काउंटरस्टेनिंग बैक्टीरिया या उनकी संरचनाएं जिन्हें रंगहीन कर दिया गया है, उन्हें आसान अवलोकन के लिए अक्सर काउंटरस्टेन समाधान के साथ काउंटरस्टेनिंग किया जाता है। तीव्र कंट्रास्ट बनाने के लिए काउंटरस्टेनिंग घोल का रंग प्राथमिक रंगाई घोल से भिन्न होता है। काउंटरस्टेनिंग बहुत मजबूत नहीं होनी चाहिए, ताकि प्रारंभिक धुंधलापन का रंग छिप न जाए।
