कन्फोकल लेजर माइक्रोस्कोपी के क्या फायदे हैं?
पारंपरिक वाइड-फील्ड माइक्रोस्कोप की तुलना में, लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोपी में उच्च परिभाषा, उच्च रिज़ॉल्यूशन और उच्च संवेदनशीलता की विशेषताएं हैं। बायोमेडिसिन के क्षेत्र में इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है और यह इस क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण इमेजिंग उपकरण बन गया है। कन्फोकल को इतना प्यार क्यों मिल सकता है और इसके क्या फायदे हैं? यह आलेख कन्फोकल के फायदों पर चर्चा करने के लिए तीन पहलुओं को सूचीबद्ध करता है।
सिग्नल को केवल फोकल प्लेन पर एकत्रित करें, जिससे छवि धुंधली से स्पष्ट हो जाएगी
तो कन्फोकल माइक्रोस्कोपी यह लाभ कैसे प्राप्त करती है? यह मुख्य कन्फोकल हार्डवेयर-पिनहोल के कारण होता है, जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है। यह डिटेक्टर के सामने एक छोटा छेद है और इसे नमूने के फोकल प्लेन से जुड़े ऑप्टिकल प्लेन पर रखा गया है। जब उत्तेजना प्रकाश नमूना को विकिरणित करता है, तो नमूना क्षेत्र के फोकल विमान और गैर-फोकल विमान दोनों प्रतिदीप्ति संकेत उत्पन्न करने के लिए उत्साहित होंगे, उचित पिनहोल आकार (आमतौर पर 1 एयू) को समायोजित करें, ताकि फोकल विमान पर प्रतिदीप्ति संकेत हो (हरी बिंदीदार रेखा) फ्लोरोसेंट सिग्नल (लाल और नीली धराशायी रेखाएं) हो सकते हैं जो फोकल प्लेन से बाहर डिटेक्टर तक पहुंचने के लिए पिनहोल से गुजरते हैं, पिनहोल के माध्यम से डिटेक्टर तक नहीं पहुंच सकते हैं। हार्डवेयर पिनहोल को जोड़ने के माध्यम से, कन्फोकल सामान्य प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी बनाने की विधि को बदले बिना स्पष्ट और उच्च गुणवत्ता वाली छवियां प्राप्त कर सकता है।
पिनहोल के अस्तित्व के कारण, हम केवल फोकल प्लेन पर सिग्नल प्राप्त कर सकते हैं और एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन वाली दो-आयामी छवि प्राप्त कर सकते हैं। Z-अक्ष स्थिति को लगातार समायोजित करके, विभिन्न Z-अक्ष स्थितियों पर दो-आयामी छवियां प्राप्त की जा सकती हैं, और निरंतर "ऑप्टिकल स्लाइस" छवियों की एक श्रृंखला प्राप्त की जा सकती है। इन ऑप्टिकल स्लाइस को प्राप्त करने के बाद, एक स्पष्ट 3डी छवि बनाने के लिए 3डी छवि को फिर से बनाने के लिए उपकरण सॉफ्टवेयर से लैस 3डी मॉड्यूल का उपयोग किया जा सकता है। ऑप्टिकल स्लाइस छवियों का यह गैर-विनाशकारी, निरंतर संग्रह "सेल सीटी" के कार्य को साकार करता है।
कोलोकलाइज़ेशन परिणामों की सटीकता छवि के रिज़ॉल्यूशन से निकटता से संबंधित है, इसलिए हमें कोलोकलाइज़ेशन प्रयोग करते समय एक उच्च रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग विधि चुनने की आवश्यकता है। पारंपरिक सूक्ष्मदर्शी की तुलना में, कन्फोकल माइक्रोस्कोपी अपने उच्च-रिज़ॉल्यूशन लाभों के कारण कोलोकलाइज़ेशन अनुसंधान के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बन गया है।
विवर्तन सीमा के अस्तित्व के कारण, पारंपरिक कन्फोकल ऑप्टिकल रिज़ॉल्यूशन लगभग 200nm है। जब हमें 200nm से बड़ी संरचनाओं का निरीक्षण करने की आवश्यकता होती है, तो कन्फोकल कोलोकलाइज़ेशन की डिग्री को सटीक रूप से निर्धारित कर सकता है। यदि कोलोकलाइज़ेशन विश्लेषण की आवश्यकता है, तो कॉन्फ़ोकल सॉफ़्टवेयर में सुसज्जित कोलोकलाइज़ेशन विश्लेषण मॉड्यूल का चयन किया जा सकता है।
