प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करना: तकनीक और कौशल

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करना: तकनीक और कौशल

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप तकनीकी पैरामीटर 1. वाइड-एंगल ऐपिस 2. अक्रोमेटिक ऑब्जेक्टिव लेंस 3. चार-छेद ऑब्जेक्टिव लेंस कनवर्टर 4. एपी-फ्लोरोसेंट डिवाइस ब्लू (बी) ग्रीन (जी) उत्तेजना प्रणाली 1 00W पारा लैंप 5। समाक्षीय मोटे और बारीक फोकस समायोजन तंत्र: समायोजन फोकस रेंज: 15 मिमी माइक्रो-मूवमेंट ग्रिड मान: 0.002 मिमी 6. डबल-लेयर मैकेनिकल टेबल अनुदैर्ध्य मूवमेंट रेंज: 70 मिमी लेटरल मूवमेंट रेंज: 50 मिमी

कौशल विधि का प्रयोग करें

(1) ग्लास स्लाइड
ग्लास स्लाइड की मोटाई 0.8 और 1.2 मिमी के बीच होनी चाहिए। एक स्लाइड जो बहुत मोटी है वह एक ओर अधिक प्रकाश को अवशोषित करेगी, और दूसरी ओर, उत्तेजना प्रकाश को नमूने पर केंद्रित नहीं किया जा सकता है। स्लाइड चिकनी, मोटाई में एक समान और स्पष्ट ऑटोफ्लोरेसेंस से मुक्त होनी चाहिए। कभी-कभी क्वार्ट्ज ग्लास स्लाइड का उपयोग किया जाता है।

(2) शीशे को ढक देना
कवर ग्लास की मोटाई लगभग 0.17 मिमी, चिकनी है। उत्तेजना प्रकाश को मजबूत करने के लिए, एक हस्तक्षेप कवर ग्लास का भी उपयोग किया जा सकता है, जो पदार्थों की कई परतों (जैसे मैग्नीशियम फ्लोराइड) के साथ लेपित एक विशेष कवर ग्लास होता है, जिसका विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश पर अलग-अलग हस्तक्षेप प्रभाव होता है, जो बना सकता है प्रतिदीप्ति सुचारू रूप से चलती है। रोमांचक प्रकाश को पार किया जाता है और परावर्तित किया जाता है, और यह परावर्तित उत्तेजना प्रकाश नमूने को उत्तेजित करता है।

(3) नमूना
ऊतक के टुकड़े या अन्य नमूने बहुत मोटे नहीं होने चाहिए। यदि यह बहुत गाढ़ा है, तो अधिकांश उत्तेजना प्रकाश नमूने के निचले हिस्से में खपत होगा, जबकि वस्तुनिष्ठ लेंस द्वारा सीधे देखा गया ऊपरी हिस्सा पूरी तरह से उत्तेजित नहीं होगा। इसके अलावा, सेल ओवरलैपिंग या अशुद्धता आवरण, निर्णय को प्रभावित करते हैं।

(4) माउंटिंग एजेंट
ग्लिसरीन का उपयोग आमतौर पर माउंटिंग एजेंट के रूप में किया जाता है, जिसमें कोई ऑटोफ्लोरेसेंस नहीं होना चाहिए, रंगहीन और पारदर्शी होना चाहिए, और पीएच 8 पर फ्लोरोसेंस की चमक तेज होती है। इसलिए, ग्लिसरॉल और 0.5mol/l कार्बोनेट बफर समाधान का पीएच 9.{6}} से 9.5 के बराबर मिश्रण आमतौर पर माउंटिंग एजेंट के रूप में उपयोग किया जाता है।

(5) दर्पण तेल
आम तौर पर, जब नमूनों को डार्क-फील्ड प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और तेल विसर्जन लेंस के साथ देखा जाता है, तो विसर्जन तेल का उपयोग किया जाना चाहिए। विशेष गैर-फ्लोरोसेंट विसर्जन तेल का उपयोग करना सबसे अच्छा है। इसके स्थान पर उपरोक्त ग्लिसरीन का भी उपयोग किया जा सकता है और तरल पैराफिन का भी उपयोग किया जा सकता है, लेकिन अपवर्तनांक कम होता है, जिससे छवि गुणवत्ता पर थोड़ा प्रभाव पड़ता है। प्रभाव।