ईमानदार बायोफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का सिद्धांत एक अत्यधिक कुशल बिंदु प्रकाश स्रोत (जैसे कि एक अल्ट्रा-हाई प्रेशर पारा लैंप) का उपयोग करना है, जो प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (जैसे कि पराबैंगनी प्रकाश 3650 λ या बैंगनी नीला प्रकाश 4200 λ) के माध्यम से एक रंग फ़िल्टर प्रणाली के माध्यम से उत्तेजना प्रकाश के रूप में एक रंग फिल्टर प्रणाली का उत्सर्जन करता है। फिर, इसे उद्देश्य लेंस के पीछे एक अवरुद्ध (या दबाने) फ़िल्टर द्वारा फ़िल्टर किया जाता है और ऐपिस के आवर्धक प्रभाव के माध्यम से देखा जाता है।
ब्लॉकिंग फ़िल्टर के दो कार्य हैं: सबसे पहले, यह प्रतिदीप्ति के साथ हस्तक्षेप करने और आंखों को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए ऐपिस में प्रवेश करने से उत्तेजना प्रकाश को अवशोषित करता है और अवरुद्ध करता है; दूसरा एक विशिष्ट फ्लोरोसेंट रंग का प्रदर्शन करते हुए, विशिष्ट प्रतिदीप्ति को गुजरने के लिए चुनना और अनुमति देना है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप को प्रकाश पथ के सिद्धांत के आधार पर दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है:
1। संचरण प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप
पुराने प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप नमूना सामग्री के माध्यम से उत्तेजना प्रकाश स्रोत को पारित करके प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए एक स्पॉटलाइट का उपयोग करते हैं। इसका लाभ कम आवर्धन पर मजबूत प्रतिदीप्ति है, लेकिन इसका नुकसान यह है कि बढ़ती आवर्धन के साथ इसकी प्रतिदीप्ति कम हो जाती है। तो यह केवल बड़े नमूना सामग्रियों को देखने के लिए उपयुक्त है।
2। प्रकाश प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप गिरना
उत्तेजना प्रकाश नमूना की सतह पर उद्देश्य लेंस से नीचे गिरता है, एक ही उद्देश्य लेंस का उपयोग करके रोशनी कंडेनसर और प्रतिदीप्ति एकत्र करने के लिए उद्देश्य लेंस का उपयोग करता है।
एक दोहरी रंग बीम स्प्लिटर (डाइक्रोइक मिरर) को ऑप्टिकल पथ में जोड़ा जाना चाहिए, जो ऑप्टिकल अक्ष के साथ 45 डिग्री कोण बनाता है। उत्तेजना प्रकाश उद्देश्य लेंस में परिलक्षित होता है और नमूने पर केंद्रित होता है। नमूने द्वारा उत्पन्न प्रतिदीप्ति, साथ ही साथ उद्देश्य लेंस और कवर ग्लास की सतह से परिलक्षित उत्तेजना प्रकाश, एक ही समय में उद्देश्य लेंस में प्रवेश करें और उत्तेजना प्रकाश और प्रतिदीप्ति को अलग करने के लिए दोहरे रंग बीम स्प्लिटर पर लौटें। अवशिष्ट उत्तेजना प्रकाश को तब फ़िल्टर अवशोषण द्वारा अवरुद्ध किया जाता है। यदि उत्तेजना फ़िल्टर के विभिन्न संयोजनों, दोहरे रंग बीम विभाजक, और अवरुद्ध फिल्टर का उपयोग किया जाता है, तो वे विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रतिक्रिया उत्पादों की जरूरतों को पूरा कर सकते हैं।
इस प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के फायदे एक समान क्षेत्र रोशनी, स्पष्ट इमेजिंग और बड़े आवर्धन के साथ मजबूत प्रतिदीप्ति हैं।
