प्रकाश पथ के आधार पर प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी दो प्रकार के होते हैं।

प्रकाश पथ के आधार पर प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी दो प्रकार के होते हैं।

1. ट्रांसमिशन फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप: उत्तेजना प्रकाश स्रोत प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए एक कंडेनसर के माध्यम से नमूना सामग्री से गुजरता है। एक डार्क फील्ड कलेक्टर का आमतौर पर उपयोग किया जाता है, या एक साधारण कलेक्टर का उपयोग किया जा सकता है, और परावर्तक को नमूने में उत्तेजना प्रकाश को मोड़ने और साइड-रेडिएट करने के लिए समायोजित किया जाता है। यह एक पुराना फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप है। लाभ यह है कि कम आवर्धन पर प्रतिदीप्ति मजबूत होती है, लेकिन नुकसान यह है कि आवर्धन बढ़ने पर प्रतिदीप्ति कमजोर हो जाती है। इसलिए, बड़े नमूना सामग्रियों का निरीक्षण करना बेहतर है।

2. एपी-फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप आधुनिक समय में विकसित एक नए प्रकार का फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप है। उपरोक्त से अंतर यह है कि उत्तेजना प्रकाश ऑब्जेक्टिव लेंस से नमूना सतह तक नीचे की ओर गिरता है, अर्थात, एक ही ऑब्जेक्टिव लेंस का उपयोग रोशनी कंडेनसर और फ्लोरोसेंस एकत्र करने के लिए ऑब्जेक्टिव लेंस के रूप में किया जाता है। ऑप्टिकल पथ में एक दो-रंग बीम स्प्लिटर को जोड़ने की आवश्यकता होती है, जो ऑप्टिकल यूरेनियम के साथ 45% है। कोण, उत्तेजना प्रकाश ऑब्जेक्टिव लेंस में परिलक्षित होता है और नमूने पर केंद्रित होता है। नमूने द्वारा उत्पन्न प्रतिदीप्ति और ऑब्जेक्टिव लेंस सतह और कवर ग्लास सतह द्वारा परावर्तित उत्तेजना प्रकाश एक ही समय में ऑब्जेक्टिव लेंस में प्रवेश करते हैं और द्विवर्णी बीम स्प्लिटर में वापस आते हैं, ताकि उत्तेजना प्रकाश फ्लोरोसेंस से अलग हो जाए, अवशिष्ट उत्तेजना प्रकाश को फिर ब्लॉकिंग फ़िल्टर द्वारा अवशोषित किया जाता है। यदि आप विभिन्न उत्तेजना फ़िल्टर / दोहरे रंग बीम स्प्लिटर / ब्लॉकिंग फ़िल्टर संयोजन आवेषण का उपयोग करते हैं, तो आप विभिन्न फ्लोरोसेंस प्रतिक्रिया उत्पादों की आवश्यकताओं को पूरा कर सकते हैं। इस प्रकार के प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का लाभ यह है कि दृश्य क्षेत्र समान रूप से प्रकाशित होता है, छवि स्पष्ट होती है, तथा आवर्धन जितना अधिक होता है, प्रतिदीप्ति उतनी ही मजबूत होती है।

(2) प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का उपयोग कैसे करें।
1. प्रकाश स्रोत चालू करें, और अल्ट्रा-हाई-प्रेशर मर्करी लैंप को अपने सबसे चमकीले बिंदु तक पहुंचने के लिए कई मिनट तक गर्म होने की आवश्यकता होती है।

2. ट्रांसमिशन फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप के लिए प्रकाश स्रोत और कंडेनसर के बीच आवश्यक उत्तेजना फ़िल्टर स्थापित करना आवश्यक है, और ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे संबंधित ब्लॉकिंग फ़िल्टर स्थापित करना आवश्यक है। एपि-फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप को प्रकाश पथ के स्लॉट में आवश्यक उत्तेजना फ़िल्टर/दोहरे रंग की बीम स्प्लिटर/ब्लॉकिंग फ़िल्टर डालने की आवश्यकता होती है।

3. निरीक्षण करने के लिए कम आवर्धन वाले सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करें, तथा प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के विभिन्न मॉडलों के समायोजन उपकरणों के अनुसार प्रकाश स्रोत के केंद्र को समायोजित करें, ताकि यह संपूर्ण प्रकाश स्थान के केंद्र में स्थित हो।

4. नमूना टुकड़ा रखें और निरीक्षण करने के लिए फोकस समायोजित करें। कृपया उपयोग के दौरान ध्यान दें: आंखों को नुकसान से बचने के लिए सीधे अपनी आंखों से फिल्टर का निरीक्षण न करें; जब तेल लेंस के साथ नमूना का निरीक्षण करते हैं, तो आपको एक विशेष गैर-फ्लोरोसेंट तेल लेंस का उपयोग करना चाहिए; उच्च दबाव वाले पारा लैंप को बंद करने के तुरंत बाद फिर से नहीं खोला जा सकता है। इसे 5 मिनट के बाद फिर से चालू किया जा सकता है, अन्यथा यह अस्थिर हो जाएगा और पारा लैंप के जीवन को प्रभावित करेगा।

(3) शिक्षण मंच पर प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के नीचे नीले-बैंगनी प्रकाश फिल्टर का उपयोग करके निरीक्षण करें। यह देखा जा सकता है कि मार्ग ओ है। 01% एक्रिडिन ऑरेंज फ्लोरोसेंट डाई से रंगे कोशिकाओं में, नाभिक और कोशिका द्रव्य प्रतिदीप्ति के दो अलग-अलग रंगों (गहरे हरे और नारंगी-लाल) का उत्पादन करने के लिए उत्तेजित होते हैं।