प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का सिद्धांत और संरचनात्मक विशेषताएं
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए नमूने में फ्लोरोसेंट पदार्थों को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश के रूप में फिल्टर सिस्टम के माध्यम से एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (जैसे पराबैंगनी प्रकाश 3650 इंच या बैंगनी नीली रोशनी 4200 इंच) के प्रकाश को उत्सर्जित करने के लिए उच्च चमकदार दक्षता वाले एक बिंदु का उपयोग करती है। विभिन्न रंगों के बाद, ऑब्जेक्टिव लेंस और ऐपिस के आवर्धन के माध्यम से निरीक्षण करें। इस तरह, एक मजबूत कंट्रास्ट पृष्ठभूमि के तहत, भले ही प्रतिदीप्ति बहुत कमजोर हो, इसे पहचानना आसान है और इसमें उच्च संवेदनशीलता है। इसका उपयोग मुख्य रूप से कोशिका संरचना और कार्य और रासायनिक संरचना के अनुसंधान के लिए किया जाता है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप की मूल संरचना एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप और कुछ सहायक उपकरण (जैसे एक फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत, एक उत्तेजना फिल्टर, एक दो-रंग बीम स्प्लिटर और एक अवरुद्ध फिल्टर, आदि) से बनी होती है। फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत - आम तौर पर अल्ट्रा-उच्च दबाव पारा लैंप (50-200W) का उपयोग करते हैं, जो विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश का उत्सर्जन कर सकता है, लेकिन प्रत्येक फ्लोरोसेंट पदार्थ में एक उत्तेजना तरंग दैर्ध्य होता है जो सबसे मजबूत प्रतिदीप्ति पैदा करता है, इसलिए एक उत्तेजना फिल्टर (आम तौर पर, इसमें पराबैंगनी, बैंगनी, नीले और हरे उत्तेजना फिल्टर होते हैं), जो केवल एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के उत्तेजना प्रकाश को गुजरने देते हैं और अन्य प्रकाश को अवशोषित करते हुए नमूने को विकिरणित करते हैं। प्रत्येक पदार्थ को उत्तेजना प्रकाश द्वारा विकिरणित करने के बाद, यह बहुत ही कम समय में विकिरण तरंग दैर्ध्य की तुलना में लंबी तरंग दैर्ध्य के साथ दृश्यमान प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। प्रतिदीप्ति विशिष्ट है और आमतौर पर उत्तेजना प्रकाश की तुलना में कमजोर है। विशिष्ट प्रतिदीप्ति का निरीक्षण करने के लिए, ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे अवरोधन (या दमन) जोड़ा जाना चाहिए और इसके साथ संयोजन में उपयोग किया जाना चाहिए।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और साधारण सूक्ष्मदर्शी के बीच अंतर
1. रोशनी विधि आम तौर पर एपिस्कोपिक होती है, यानी प्रकाश स्रोत को ऑब्जेक्टिव लेंस के माध्यम से नमूने पर प्रक्षेपित किया जाता है;
2. प्रकाश स्रोत पराबैंगनी प्रकाश है, तरंग दैर्ध्य छोटा है, और रिज़ॉल्यूशन सामान्य सूक्ष्मदर्शी की तुलना में अधिक है;
3. दो विशेष फिल्टर हैं, एक प्रकाश स्रोत के सामने का उपयोग दृश्य प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है, और एक ऐपिस और ऑब्जेक्टिव लेंस के बीच का उपयोग मानव आंख की सुरक्षा के लिए पराबैंगनी किरणों को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप भी एक प्रकार का ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप है, मुख्य अंतर यह है कि दोनों की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य अलग-अलग है। यह संरचना और उपयोग के संदर्भ में प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के बीच अंतर को निर्धारित करता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी इम्यूनोफ्लोरेसेंट साइटोकैमिस्ट्री में एक आवश्यक उपकरण है। यह प्रकाश स्रोत, फिल्टर प्लेट सिस्टम और ऑप्टिकल सिस्टम जैसे मुख्य घटकों से बना है। यह प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए नमूने को उत्तेजित करने के लिए प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य का उपयोग करना है, और उद्देश्य लेंस और ऐपिस प्रणाली को बढ़ाकर नमूने की प्रतिदीप्ति छवि का निरीक्षण करना है।
