कई विशेष ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप और उनके अंतर
1 डार्क फील्ड माइक्रोस्कोप
डार्क फील्ड माइक्रोस्कोप में वस्तु के अंदर की बारीक संरचना को देखने का कार्य नहीं होता है, लेकिन यह 0.004 माइक्रोमीटर से ऊपर के कणों के अस्तित्व और गति को अलग कर सकता है। इसलिए, इसका उपयोग अक्सर जीवित कोशिकाओं की संरचना और इंट्रासेल्युलर कणों की गति का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है।
डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी का मूल सिद्धांत टिन्डल प्रभाव है। जब प्रकाश की किरण एक अंधेरे कमरे से होकर गुजरती है, तो हवा में एक चमकदार धूल "मार्ग" को आपतित प्रकाश की लंबवत दिशा से देखा जा सकता है। यह घटना टिन्डल प्रभाव है।
एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप पर डार्क फील्ड माइक्रोस्कोप को डार्क फील्ड कंडेनसर से बदलने के बाद, कंडेनसर की आंतरिक परवलयिक संरचना के अवरोध के कारण, निरीक्षण की जाने वाली वस्तु की सतह पर विकिरणित प्रकाश सीधे उद्देश्य लेंस में प्रवेश नहीं कर सकता है और ऐपिस, और केवल बिखरी हुई रोशनी ही आर-पार हो सकती है, इसलिए देखने का क्षेत्र अंधेरा है।
डार्कफील्ड माइक्रोस्कोपी का मूल उपयोग इस प्रकार है:
1. एक डार्क फील्ड कंडेनसर स्थापित करें (या हल्के ढाल बनाने के लिए मोटे काले कागज का उपयोग करें और डार्क फील्ड प्रभाव प्राप्त करने के लिए इसे एक साधारण माइक्रोस्कोप के कंडेनसर के नीचे रखें)।
2. प्रत्यक्ष प्रकाश को ऑब्जेक्टिव लेंस में प्रवेश करने से रोकने के लिए एक मजबूत प्रकाश स्रोत चुनें, आमतौर पर माइक्रोस्कोप प्रकाश के साथ।
3. कंडेनसर और ग्लास स्लाइड के बीच देवदार के तेल की एक बूंद डालें, जिससे कंडेनसर पर रोशन प्रकाश के पूर्ण प्रतिबिंब, निरीक्षण की जाने वाली वस्तु तक पहुंचने में विफलता और अंधेरे क्षेत्र की रोशनी से बचा जा सके।
4. केंद्र समायोजन करें, यानी कंडेनसर को क्षैतिज रूप से घुमाएं ताकि कंडेनसर का ऑप्टिकल अक्ष और माइक्रोस्कोप का ऑप्टिकल अक्ष सख्ती से एक सीधी रेखा पर हो। कंडेनसर को उठाएं और नीचे करें, कंडेनसर के केंद्र बिंदु (चित्र 1-2 में शंक्वाकार किरण का शीर्ष) को परीक्षण की जाने वाली वस्तु के साथ संरेखित करें।
5. कंडेनसर के अनुरूप ऑब्जेक्टिव लेंस का चयन करें, फोकल लंबाई को समायोजित करें, और साधारण माइक्रोस्कोप की विधि के अनुसार संचालित करें।
stereomicroscope
स्टीरियो माइक्रोस्कोप, जिन्हें ठोस माइक्रोस्कोप या विच्छेदन दर्पण के रूप में भी जाना जाता है, एक सीधी त्रि-आयामी अंतरिक्ष छवि की छवि बनाते हैं, और इसमें मजबूत स्टीरियोस्कोपिक प्रभाव, स्पष्ट और विस्तृत इमेजिंग, लंबी कार्य दूरी (आमतौर पर 110 मिमी) और निरंतर आवर्धन देखने की विशेषताएं होती हैं। अक्सर विच्छेदन के दौरान वास्तविक समय के अवलोकन के लिए जीव विज्ञान में उपयोग किया जाता है
एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का प्रकाश स्रोत समानांतर प्रकाश होता है, इसलिए यह एक द्वि-आयामी समतल छवि बनाता है; जबकि एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप एक दोहरे चैनल ऑप्टिकल पथ को अपनाता है, और दूरबीन ट्यूब में बाएं और दाएं बीम में देखने का एक निश्चित कोण होता है (आमतौर पर 12o15o), इसलिए यह त्रि-आयामी अंतरिक्ष में एक स्टीरियोस्कोपिक छवि बना सकता है।
स्टीरियो माइक्रोस्कोप का उपयोग सामान्य प्रकाश माइक्रोस्कोप के समान ही किया जाता है, लेकिन ये अधिक सुविधाजनक होते हैं। दोनों के बीच मुख्य अंतर यह है:
1. स्टीरियो माइक्रोस्कोप की निरीक्षण वस्तुओं को स्लाइड बनाने की आवश्यकता नहीं है।
2. स्टीरियो माइक्रोस्कोप का चरण सीधे दर्पण आधार पर तय किया गया है, और काले और सफेद दो तरफा पैनल या ग्लास पैनल से सुसज्जित है, और ऑपरेटर माइक्रोस्कोप निरीक्षण की वस्तु और आवश्यकताओं के अनुसार चयन कर सकता है।
3. स्टीरियो माइक्रोस्कोप की इमेजिंग सीधी है, जो विच्छेदन संचालन के लिए सुविधाजनक है।
4. स्टीरियो माइक्रोस्कोप में केवल एक ऑब्जेक्टिव लेंस होता है, और इसके आवर्धन को समायोजन पेंच को घुमाकर लगातार समायोजित किया जा सकता है।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी इंट्रासेल्युलर पदार्थों द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति तीव्रता पर गुणात्मक और मात्रात्मक अनुसंधान के लिए एक ऑप्टिकल उपकरण है।
कोशिकाओं में दो प्रकार के फ्लोरोसेंट पदार्थ होते हैं, एक पराबैंगनी किरणों, जैसे क्लोरोफिल, आदि द्वारा विकिरणित होने के बाद सीधे फ्लोरोसेंट हो सकता है; अन्य पदार्थों में यह गुण नहीं होता है, लेकिन यदि विशिष्ट फ्लोरोसेंट रंगों या फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी से रंगा जाए, तो उन्हें पराबैंगनी किरणों द्वारा फ्लोरोसेंट किया जा सकता है। विकिरण के बाद भी प्रतिदीप्त हो सकता है
ईमानदार बायोल्यूमिनसेंस माइक्रोस्कोप/उलटा बायोल्यूमिनसेंस माइक्रोस्कोप
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का सिद्धांत फिल्टर सिस्टम के माध्यम से एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (जैसे पराबैंगनी प्रकाश 3650λ या बैंगनी-नीली रोशनी 4200λ) के प्रकाश को उत्सर्जित करने के लिए उच्च चमकदार दक्षता (जैसे अल्ट्रा-उच्च दबाव पारा लैंप) के साथ एक बिंदु प्रकाश स्रोत का उपयोग करना है। नमूने में फ्लोरोसेंट पदार्थों को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश के रूप में। विभिन्न रंगों की प्रतिदीप्ति उत्सर्जित होने के बाद, इसे ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे अवरुद्ध (या दबाने वाले) फिल्टर द्वारा फ़िल्टर किया जाता है, और फिर ऐपिस के आवर्धन के माध्यम से देखा जाता है।
अवरोधक फिल्टर के दो कार्य हैं: एक उत्तेजना प्रकाश को अवशोषित करना और उसे ऐपिस में प्रवेश करने से रोकना है ताकि प्रतिदीप्ति में गड़बड़ी न हो और आंखों को नुकसान न पहुंचे; दूसरा है एक विशिष्ट प्रतिदीप्ति का चयन करना और उसे गुजरने देना, एक विशिष्ट प्रतिदीप्ति रंग दिखाना।
ऑप्टिकल पथ के सिद्धांत के अनुसार प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी को दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है:
1. ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी
पुराने प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में, प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश स्रोत को एक कंडेनसर के माध्यम से नमूना सामग्री के माध्यम से पारित किया जाता है। लाभ यह है कि कम आवर्धन पर प्रतिदीप्ति मजबूत होती है, लेकिन नुकसान यह है कि आवर्धन बढ़ने के साथ प्रतिदीप्ति कम हो जाती है। इसलिए यह केवल बड़े नमूना सामग्री के अवलोकन के लिए उपयुक्त है।
2. एपि-फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी
उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस से नमूने की सतह तक गिरता है, अर्थात, उसी वस्तुनिष्ठ लेंस का उपयोग रोशनी कंडेनसर और प्रतिदीप्ति एकत्र करने के लिए वस्तुनिष्ठ लेंस के रूप में किया जाता है।
ऑप्टिकल पथ में एक डाइक्रोइक बीम स्प्लिटर (डाइक्रोइक मिरर) जोड़ने की जरूरत है, जो ऑप्टिकल अक्ष के साथ 45o का कोण बनाता है। उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस में परावर्तित होता है और नमूने पर एकत्रित होता है। स्लाइड सतह से परावर्तित उत्तेजना प्रकाश एक ही समय में उद्देश्य लेंस में प्रवेश करता है, दो-रंग बीम स्प्लिटर पर लौटता है, उत्तेजना प्रकाश को प्रतिदीप्ति से अलग करता है, और शेष उत्तेजना प्रकाश को अवरुद्ध फिल्टर द्वारा अवशोषित किया जाता है। यदि आप विभिन्न उत्तेजना फिल्टर/दो-रंग बीम स्प्लिटर्स/अवरुद्ध फिल्टर के संयोजन में बदलते हैं, तो विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रतिक्रिया उत्पादों की जरूरतों को पूरा किया जा सकता है।
इस प्रकार के प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का लाभ यह है कि दृश्य क्षेत्र की रोशनी एक समान होती है, इमेजिंग स्पष्ट होती है, और आवर्धन जितना अधिक होगा, प्रतिदीप्ति उतनी ही मजबूत होगी।
चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप
चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप एक माइक्रोस्कोप है जो प्रकाश के किसी वस्तु से गुजरने पर उत्पन्न चरण अंतर (या ऑप्टिकल पथ अंतर) को आयाम (प्रकाश की तीव्रता) में परिवर्तन में परिवर्तित कर सकता है। इसका उपयोग मुख्य रूप से जीवित कोशिकाओं, बिना दाग वाले ऊतक वर्गों या कंट्रास्ट की कमी वाले दाग वाले नमूनों का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है।
मानव आँख केवल दृश्य प्रकाश की तरंग दैर्ध्य (रंग) और आयाम में परिवर्तन की पहचान कर सकती है, लेकिन चरण परिवर्तन की नहीं। हालाँकि, अधिकांश जैविक नमूने अत्यधिक पारदर्शी होते हैं, और प्रकाश तरंग का आयाम गुजरने के बाद मूल रूप से अपरिवर्तित रहता है, और केवल चरण बदलता है।
चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप मूल रूप से नमूने से गुजरने वाले दृश्य प्रकाश के ऑप्टिकल पथ अंतर को आयाम अंतर में बदल देता है, जिससे विभिन्न संरचनाओं के बीच कंट्रास्ट में सुधार होता है और विभिन्न संरचनाएं स्पष्ट रूप से दिखाई देती हैं। नमूने से गुजरने के बाद प्रकाश अपवर्तित हो जाता है, मूल ऑप्टिकल पथ से भटक जाता है, और एक ही समय में 1/4λ (तरंग दैर्ध्य) तक विलंबित हो जाता है। यदि इसे 1/4λ तक बढ़ाया या घटाया जाता है, तो ऑप्टिकल पथ अंतर 1/2λ हो जाता है, और दो बीम ऑप्टिकल अक्ष को मजबूत करने, आयाम को बढ़ाने या घटाने, कंट्रास्ट में सुधार करने के बाद हस्तक्षेप करते हैं।
संरचनात्मक रूप से, चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप सामान्य ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप से भिन्न होते हैं:
1. वलयाकार डायाफ्राम में एक रिंग ओपनिंग वाला डायाफ्राम होता है, जो प्रकाश स्रोत और कंडेनसर के बीच स्थापित होता है। इसका कार्य कंडेनसर से गुजरने वाले प्रकाश को एक खोखला प्रकाश शंकु बनाना और नमूने पर ध्यान केंद्रित करना है।
2. चरण प्लेट चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप प्रत्यक्ष प्रकाश या विवर्तित प्रकाश के चरण को 1/4λ तक विलंबित करने के लिए ऑब्जेक्टिव लेंस के अंदर मैग्नीशियम फ्लोराइड से लेपित एक चरण प्लेट जोड़ता है। चरण प्लेट पर दो क्षेत्र होते हैं, वह भाग जिसके माध्यम से प्रत्यक्ष प्रकाश गुजरता है उसे "संयुग्म सतह" कहा जाता है, और वह भाग जिसके माध्यम से विवर्तित प्रकाश गुजरता है उसे "क्षतिपूर्ति सतह" कहा जाता है। चरण प्लेटों को उनके कार्य प्रभाव के अनुसार दो प्रकारों में विभाजित किया गया है:
(1) एक प्लस चरण प्लेट: प्रत्यक्ष प्रकाश में 1/4λ की देरी होती है, और आयाम बढ़ाने के लिए प्रकाश तरंगों के दो सेटों के संयोजन के बाद प्रकाश तरंगों को आरोपित किया जाता है, और नमूना संरचना आसपास के माध्यम की तुलना में उज्जवल होती है, जिससे एक बनता है उज्ज्वल कंट्रास्ट (या नकारात्मक कंट्रास्ट)।
(2) बी प्लस चरण प्लेट: विवर्तित प्रकाश में 1/4λ की देरी होती है, और अक्ष संरेखित होने के बाद प्रकाश के दो समूहों की प्रकाश तरंगें घट जाती हैं, और आयाम छोटा हो जाता है। नमूने की संरचना आसपास के माध्यम की तुलना में अधिक गहरी है, जो एक गहरा कंट्रास्ट (या सकारात्मक कंट्रास्ट) बनाती है। फ़ेज़ प्लेट वाले ऑब्जेक्टिव लेंस को फ़ेज़ कंट्रास्ट ऑब्जेक्टिव लेंस कहा जाता है, जिसे अक्सर ऑब्जेक्टिव लेंस हाउसिंग पर "Ph" से चिह्नित किया जाता है।
