माइक्रोस्कोपी के लिए नियमित नमूने तैयार करने की आवश्यकताएँ
कन्फोकल माइक्रोस्कोप 1980 के दशक में विकसित एक युगांतरकारी उच्च तकनीक वाला नया उत्पाद है, और यह आज आणविक जीव विज्ञान और जीवन विज्ञान में महत्वपूर्ण विश्लेषणात्मक उपकरणों में से एक है। कन्फोकल माइक्रोस्कोपी प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप इमेजिंग पर आधारित है जिसमें एक लेजर स्कैनिंग डिवाइस जोड़ा जाता है, जो कोशिकाओं या ऊतकों के अंदर सूक्ष्म संरचना की फ्लोरोसेंट छवियां प्राप्त करने के लिए छवि प्रसंस्करण के लिए एक कंप्यूटर का उपयोग करता है, और उपसेलुलर स्तर पर कई शारीरिक सिग्नल मशीनों की आकृति विज्ञान में परिवर्तन का निरीक्षण करता है। आकृति विज्ञान, आणविक कोशिका जीव विज्ञान, तंत्रिका विज्ञान, औषध विज्ञान, आनुवंशिकी और अन्य वैज्ञानिक क्षेत्रों में एक शक्तिशाली अनुसंधान उपकरण बनें।
कन्फोकल माइक्रोस्कोपी के लिए नमूना तैयार करना पता लगाने से पहले एक महत्वपूर्ण कदम है। नमूनों को फ्लोरोसेंट जांच (सिंगल, डबल, ट्रिपल) के साथ लेबल करने की आवश्यकता है।
नमूने स्थिर या जीवित ऊतक, या स्थिर या जीवित अनुवर्ती संस्कृतियाँ हो सकते हैं। कोशिकाओं को कन्फोकल विशेष छोटे कल्चर डिश या कवरस्लिप पर सुसंस्कृत किया जाना चाहिए। कोशिकाओं को निलंबित करें, स्लाइस को हिलाएं या गिराएं, और कवरस्लिप्स कवर फिल्म से ढक दें। नमूने की Zda मोटाई लगभग 1~2मिमी है, उपयोग किए गए कवर ग्लास की मोटाई 0.17मिमी से कम होनी चाहिए, और स्लाइड ग्लास की मोटाई 0.8~1.2 के बीच होनी चाहिए मिमी, और सतह चिकनी है, मोटाई एक समान है, और कोई स्पष्ट हस्तक्षेप प्रतिदीप्ति नहीं है। माउंटिंग माध्यम का उपयोग अक्सर निश्चित नमूनों के लिए किया जाता है, और 8 के पीएच के साथ पीबीएस में तैयार ग्लिसरॉल का उपयोग आमतौर पर माउंटिंग के लिए किया जाता है।
नियमित नमूना तैयार करने की आवश्यकताएँ:
1. रंगों का चयन
चूंकि कन्फोकल माइक्रोस्कोप प्रकाश स्रोत के रूप में एकल-तरंग दैर्ध्य लेजर का उपयोग करता है, इसलिए फ्लोरोसेंट रंगों का चयन कन्फोकल माइक्रोस्कोप से सुसज्जित लेजर की तरंग दैर्ध्य पर आधारित होना चाहिए। यदि एक ही नमूने में कई फ्लोरोसेंट रंग हैं, तो उनके उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य पर भी यथासंभव विचार किया जाना चाहिए। क्रॉस-रंग समस्याओं से बचने के लिए ओवरलैप न करें।
2. नमूना वाहक का चयन
आम तौर पर, कन्फोकल माइक्रोस्कोप का हाई-पावर ऑब्जेक्टिव लेंस ऑयल लेंस होता है, इसका संख्यात्मक एपर्चर छोटा होता है, और लेंस और नमूने के बीच काम करने की दूरी 0.17 मिमी से अधिक नहीं होनी चाहिए। स्लाइड और कवरस्लिप ठीक हैं। यदि यह निलंबित कोशिकाएं या निलंबित कण हैं, तो अवलोकन के लिए नमूना ले जाने के लिए कन्फोकल माइक्रोस्कोप के लिए समर्पित पेट्री डिश का उपयोग किया जा सकता है।
3. बढ़ते माध्यम का चयन
यदि नमूने को केवल एक बार देखने की आवश्यकता है और प्रतिदीप्ति आसानी से बुझती नहीं है, तो आप स्लाइड को सील करने के लिए ग्लिसरॉल मिश्रण की एक निश्चित सांद्रता चुन सकते हैं। यदि नमूने को कुछ समय के लिए रखा जाना चाहिए और कई बार लिया जाना चाहिए, तो फ्लोरोसेंट संकेतों के नुकसान को कम करने के लिए एक एंटी-फ्लोरेसेंस शमन माउंटिंग माध्यम का चयन किया जाना चाहिए।
