फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप स्लाइड की तैयारी के लिए आवश्यकताएँ
(1) ग्लास स्लाइड
स्लाइड की मोटाई 0.8 और 1.2 मिमी के बीच होनी चाहिए। यदि स्लाइड बहुत मोटी है, तो एक ओर, यह अधिक प्रकाश को अवशोषित करेगी, और दूसरी ओर, यह नमूने पर उत्तेजना प्रकाश को इकट्ठा नहीं होने देगी। ग्लास स्लाइड चिकनी, मोटाई में एक समान होनी चाहिए और उसमें कोई स्पष्ट सहज प्रतिदीप्ति नहीं होनी चाहिए। कभी-कभी क्वार्ट्ज़ ग्लास स्लाइड की आवश्यकता होती है।
(2) कांच की स्लाइड को ढकें
कवर ग्लास की मोटाई लगभग 0.17 मिमी है और यह चिकना है। उत्तेजना प्रकाश को बढ़ाने के लिए इंटरफेरेंस कवर ग्लास का भी उपयोग किया जा सकता है। यह एक विशेष रूप से डिज़ाइन किया गया कवर ग्लास है जिसमें पदार्थों की कई परतें (जैसे मैग्नीशियम फ्लोराइड) होती हैं जिनका विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश पर अलग-अलग हस्तक्षेप प्रभाव होता है। यह प्रतिदीप्ति को सुचारू रूप से पारित करने की अनुमति दे सकता है, जबकि प्रतिबिंब उत्तेजना प्रकाश नमूने को उत्तेजित कर सकता है।
(3) नमूना
ऊतक के टुकड़े या अन्य नमूने बहुत मोटे नहीं होने चाहिए। यदि वे बहुत मोटे हैं, तो अधिकांश उत्तेजना प्रकाश नमूने के निचले हिस्से में खपत होता है, जबकि वस्तुनिष्ठ लेंस द्वारा सीधे देखा गया ऊपरी हिस्सा पूरी तरह से उत्तेजित नहीं होता है। इसके अलावा, सेल ओवरलैप या अशुद्धता मास्किंग निर्णय को प्रभावित कर सकता है।
(4) सीलिंग एजेंट
ग्लिसरीन का उपयोग आमतौर पर माउंटिंग एजेंट के रूप में किया जाता है, जिसमें कोई सहज प्रतिदीप्ति, रंगहीन और पारदर्शी नहीं होना चाहिए। प्रतिदीप्ति चमक pH 8.5-9.5 पर अपेक्षाकृत उज्ज्वल होती है और इसे जल्दी से ख़त्म करना आसान नहीं होता है। इसलिए, ग्लिसरॉल और pH 9.0-9.5 के साथ ग्लिसरॉल और 0.5mol/L कार्बोनेट बफर का एक समान मिश्रण आमतौर पर सीलिंग एजेंट के रूप में उपयोग किया जाता है।
(5) दर्पण का तेल
नमूनों का निरीक्षण करने के लिए एक अंधेरे क्षेत्र प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और एक तेल माइक्रोस्कोप का उपयोग करते समय, दर्पण तेल का उपयोग किया जाना चाहिए। विशेष गैर फ्लोरोसेंट दर्पण तेल का उपयोग किया जा सकता है, या ग्लिसरॉल को विकल्प के रूप में उपयोग किया जा सकता है। तरल पैराफिन का भी उपयोग किया जा सकता है, लेकिन अपवर्तक सूचकांक कम है और छवि गुणवत्ता पर थोड़ा प्रभाव पड़ता है।
