उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का उचित उपयोग
उलटा प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप एक बहुक्रियाशील माइक्रोस्कोप है जिसका उपयोग उच्च-स्तरीय जैविक विज्ञान अनुसंधान के क्षेत्र में किया जाता है। इसकी संरचना जटिल एवं महँगी है। इसलिए, मेडिकल स्नातक छात्रों को उल्टे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के संचालन और उपयोग को सही ढंग से समझने के लिए, शिक्षकों को पहले उल्टे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के वास्तविक संचालन का प्रदर्शन करना होगा। इससे पहले, उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के बुनियादी ज्ञान को सीखने के लिए एक पाठ्यक्रम स्थापित किया गया था, जिसमें उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी की संरचना, सिद्धांत, कार्य और बुनियादी उपयोग के तरीकों का परिचय दिया गया था, और फिर विशिष्ट ऑपरेशन में, विभिन्न नमूनों के लिए, उथले से अलग-अलग कार्यों का प्रदर्शन किया गया था। मेडिकल स्नातक छात्रों द्वारा उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के उपयोग को धीरे-धीरे गहराई से मानकीकृत करना।
1. उज्ज्वल क्षेत्र अवलोकन का सही उपयोग। उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के कार्यों में से एक उज्ज्वल क्षेत्र अवलोकन है। मूल सिद्धांत यह है कि नमूना प्रकाश द्वारा विकिरणित होने के बाद, उज्ज्वल पृष्ठभूमि में इमेजिंग का एहसास करने के लिए प्रत्येक भाग का प्रकाश अवशोषण अलग होता है। यह मुख्य रूप से दागदार या रंगीन कोशिकाओं, ऊतक वर्गों जैसे नमूनों के अवलोकन के लिए उपयुक्त है।
2. चरण कंट्रास्ट अवलोकन का सही उपयोग। उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का दूसरा कार्य चरण विपरीत अवलोकन है। इसका मूल सिद्धांत नमूने के विभिन्न भागों के ऑप्टिकल पथ अंतर को आयाम अंतर में परिवर्तित करना है। अवलोकन को एक चरण प्लेट के साथ एक चरण कंट्रास्ट ऑब्जेक्टिव लेंस और एक रिंग डायाफ्राम के साथ एक कंडेनसर लेंस के माध्यम से महसूस किया जाता है। यह मुख्य रूप से प्रायोगिक शिक्षण की प्रक्रिया में जीवित कोशिकाओं या बिना दाग वाले ऊतक वर्गों के अवलोकन के लिए लागू होता है, चरण विपरीत अवलोकन के बुनियादी संचालन तरीकों का पालन करने के लिए मेडिकल स्नातक छात्रों को सही ढंग से मार्गदर्शन करने के अलावा, उन्हें मार्गदर्शन करना अधिक महत्वपूर्ण है चरण कंट्रास्ट अवलोकन के लिए उपयोग किए जाने वाले नमूनों को समझें और उनमें महारत हासिल करें। उनके लिए, संवर्धित कोशिकाओं का सूक्ष्म अवलोकन भविष्य के वैज्ञानिक अनुसंधान में सबसे अधिक उपयोग किया जाता है। सबसे पहले, सेल उपकरण के चयन के लिए, आमतौर पर ग्लास और प्लास्टिक कल्चर डिश, कल्चर प्लेट और कल्चर बोतलों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। उनमें से अधिकांश रंगहीन और पारदर्शी हैं, और कोशिका द्रव और अन्य उपचारों को बाहर निकाले बिना सीधे उल्टे फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप पर देखे जा सकते हैं। दूसरे, सूक्ष्म अवलोकन के दौरान, उपकरण के ढक्कन को इच्छानुसार न खोलें, ताकि कोशिकाएं दूषित न हों। अंत में, ऑपरेटरों को दस्ताने, मास्क और सफेद कोट पहनने की आवश्यकता होती है, जो न केवल उनके स्वयं के स्वास्थ्य की रक्षा कर सकते हैं बल्कि कोशिका संदूषण को भी रोक सकते हैं।
3. प्रतिदीप्ति अवलोकन का सही उपयोग। उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का तीसरा कार्य प्रतिदीप्ति अवलोकन है। मूल सिद्धांत प्रतिदीप्ति उत्पन्न करने के लिए नमूने को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश का उपयोग करना है, ताकि नमूने के आकार और स्थिति के अवलोकन का एहसास हो सके। यह मुख्य रूप से फ्लोरोसेंटली लेबल वाले नमूनों के अवलोकन के लिए उपयुक्त है। प्रतिदीप्ति अवलोकन एक उल्टे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का एक महत्वपूर्ण कार्य है, और इसके सहायक उपकरण महंगे और उपयोग में विशेष हैं। मेडिकल स्नातक छात्रों को प्रतिदीप्ति अवलोकन के संचालन और उपयोग को सही ढंग से समझने के लिए, शिक्षकों को न केवल उन्हें बुनियादी संचालन विधियों को सिखाना चाहिए, बल्कि इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि उन्हें इसकी विशिष्टता में महारत हासिल करना सिखाना चाहिए। सबसे पहले, नमूनों की तैयारी में, स्लाइड ग्लास और कवर ग्लास की सतह चिकनी और उचित मोटाई होनी चाहिए (स्लाइड ग्लास 0.8 मिमी और 1.2 मिमी के बीच होना चाहिए, और कवर ग्लास लगभग 0.8 मिमी और 1.2 मिमी के बीच होना चाहिए। {5}}.17मिमी); नमूने में उचित मोटाई होनी चाहिए और कोशिकाओं को ओवरलैप होने या अशुद्धियों से ढकने से बचना चाहिए; बढ़ते माध्यम को ग्लिसरॉल और कार्बोनेट बफर (0.5mol/L pH9.0-9.5) के बराबर मात्रा के मिश्रण का उपयोग करना चाहिए। दूसरे, फ्लोरोसेंट अवलोकन से पहले, अंधेरे कमरे में वातावरण सुनिश्चित करने के लिए कमरे में बिजली की रोशनी और उल्टे फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप की सफेद रोशनी बंद कर दी जानी चाहिए। अंत में, प्रतिदीप्ति अवलोकन में, अवलोकन समय को सख्ती से नियंत्रित किया जाना चाहिए, आम तौर पर 1-2 घंटे/समय उपयुक्त होता है, अन्यथा प्रतिदीप्ति क्षीण हो जाएगी और गायब हो जाएगी; प्रकाश स्रोत को समायोजित करते समय, चश्मे को पराबैंगनी किरणों से होने वाले नुकसान से बचाने के लिए सुरक्षात्मक चश्मा पहनें।
4. इमेज कैप्चर का सही उपयोग. वैज्ञानिक अनुसंधान में, न केवल यह आवश्यक है कि उलटा प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप विभिन्न अवलोकनों को महसूस कर सके, बल्कि यह भी आवश्यक है कि उलटा प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप छवि कैप्चर का एहसास कर सके। उलटा प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप प्रणाली फोटोइलेक्ट्रिक रूपांतरण के माध्यम से एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप को कंप्यूटर के साथ जोड़ती है, न केवल ऐपिस पर सूक्ष्म अवलोकन के लिए, बल्कि कंप्यूटर पर वास्तविक समय गतिशील छवि अवलोकन, संपादन और बचत के लिए भी।
