प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का सिद्धांत और संरचनात्मक विशेषताएं
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप उत्तेजना प्रकाश के रूप में रंग फिल्टर प्रणाली के माध्यम से एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (जैसे पराबैंगनी प्रकाश 3650 या बैंगनी-नीली रोशनी 4200) के साथ प्रकाश उत्सर्जित करने के लिए उच्च चमकदार दक्षता वाले एक बिंदु का उपयोग करता है, और फिर नमूने में फ्लोरोसेंट पदार्थों को उत्सर्जित करने के लिए उत्तेजित करता है विभिन्न रंगों के साथ प्रतिदीप्ति, और फिर ऑब्जेक्टिव लेंस और ऐपिस के प्रवर्धन के माध्यम से उनका निरीक्षण करता है। इस तरह, मजबूत कंट्रास्ट पृष्ठभूमि के तहत, भले ही प्रतिदीप्ति बहुत कमजोर हो, इसे पहचानना आसान है और इसमें उच्च संवेदनशीलता है। इसका उपयोग मुख्य रूप से कोशिका संरचना और कार्य और रासायनिक संरचना के अध्ययन के लिए किया जाता है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप की मूल संरचना साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप और कुछ सहायक उपकरण (जैसे फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत, उत्तेजना फिल्टर, डाइक्रोइक बीम स्प्लिटर और ब्लॉकिंग फिल्टर, आदि) से बनी होती है। फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत - अल्ट्रा-हाई-प्रेशर मरकरी लैंप (50-200W) का आमतौर पर उपयोग किया जाता है, जो विभिन्न तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश उत्सर्जित कर सकता है, लेकिन प्रत्येक फ्लोरोसेंट पदार्थ में एक उत्तेजना प्रकाश तरंग दैर्ध्य होता है जो सबसे मजबूत प्रतिदीप्ति पैदा करता है, इसलिए यह है उत्तेजना फिल्टर (आम तौर पर पराबैंगनी, बैंगनी, नीला और हरा उत्तेजना फिल्टर) जोड़ना आवश्यक है, ताकि उत्तेजना प्रकाश की केवल एक निश्चित तरंग दैर्ध्य नमूने में संचारित हो, और अन्य सभी प्रकाश अवशोषित हो जाएं। प्रत्येक पदार्थ को उत्तेजना प्रकाश द्वारा विकिरणित करने के बाद, यह बहुत ही कम समय में विकिरण तरंग दैर्ध्य से अधिक लंबी दृश्यमान प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। प्रतिदीप्ति में विशिष्टता होती है, जो आमतौर पर उत्तेजना प्रकाश से कमजोर होती है। विशिष्ट प्रतिदीप्ति का निरीक्षण करने के लिए, ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे ब्लॉक करना (या दबाना) आवश्यक है और इसका एक साथ उपयोग किया जाना चाहिए।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और सामान्य सूक्ष्मदर्शी के बीच अंतर
1. रोशनी मोड आमतौर पर एपिसोडिक होता है, यानी, प्रकाश स्रोत को ऑब्जेक्टिव लेंस के माध्यम से नमूने पर प्रक्षेपित किया जाता है;
2. प्रकाश स्रोत सामान्य सूक्ष्मदर्शी की तुलना में कम तरंग दैर्ध्य और उच्च रिज़ॉल्यूशन वाला पराबैंगनी प्रकाश है;
3. दो विशेष फिल्टर हैं, एक प्रकाश स्रोत के सामने का उपयोग दृश्य प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है, और एक ऐपिस और ऑब्जेक्टिव लेंस के बीच का उपयोग लोगों की आंखों की सुरक्षा के लिए पराबैंगनी प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी भी एक प्रकार का ऑप्टिकल सूक्ष्मदर्शी है, मुख्य अंतर यह है कि उनकी उत्तेजना तरंग दैर्ध्य अलग-अलग होती है। यह संरचना और उपयोग में प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के बीच अंतर को निर्धारित करता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप इम्यूनोफ्लोरेसेंस साइटोकैमिस्ट्री का मूल उपकरण है। यह प्रकाश स्रोत, फिल्टर प्लेट सिस्टम और ऑप्टिकल सिस्टम से बना है। यह प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए नमूने को उत्तेजित करने के लिए एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश का उपयोग करता है, और नमूने की प्रतिदीप्ति छवि का निरीक्षण करने के लिए इसे उद्देश्य लेंस और ऐपिस प्रणाली के माध्यम से बढ़ाता है।
