पीएच मीटर - मध्यम पीएच का निर्धारण और समायोजन
सभी सूक्ष्मजीव उस वातावरण के पीएच से प्रभावित होते हैं जिसमें वे रहते हैं। अक्सर, चयनात्मक प्रजातियों की उपस्थिति पीएच रेंज को सीमित कर देती है जिसमें वे बढ़ते हैं। कभी-कभी, माध्यम की अम्लता या क्षारीयता भी विकास चयन कारक के रूप में कार्य कर सकती है। हालांकि, जैव रासायनिक परीक्षण मीडिया के लिए, पीएच रेंज जिसमें सूक्ष्मजीव सब्सट्रेट में गतिविधि प्रदर्शित करते हैं, विकास के लिए आवश्यक पीएच रेंज से कम है: इसलिए, मीडिया के पीएच को अपेक्षित सीमा तक समायोजित करना महत्वपूर्ण है। जब प्रयोगशाला माध्यम संरचना के अनुसार माध्यम तैयार करती है, तो पीएच की जांच और समायोजन किया जाना चाहिए। यह बताया जाना चाहिए कि निर्माता द्वारा उपलब्ध कराए गए तैयार सिंथेटिक निर्जलित माध्यम के लिए भी (विशेष रूप से कुछ स्टॉक निर्जलित माध्यम के लिए), प्रायोगिक माध्यम बनाने के बाद अंतिम पीएच को मापने की आवश्यकता होती है।
किसी माध्यम का pH मापने का सबसे सटीक तरीका pH मीटर है। उपयोग से पहले, इसे ज्ञात पीएच (आमतौर पर पीएच 4 से 7) के मानक बफर समाधान के साथ कैलिब्रेट किया जाना चाहिए। पीएच मीटर के इलेक्ट्रोड को आसुत जल से धोएं और इसे बीकर में कल्चर माध्यम में डुबोएं, और फिर पीएच मीटर के पैमाने से कल्चर माध्यम का पीएच पढ़ें। प्रत्येक निर्माता प्रत्येक प्रकार के पीएच मीटर के लिए विस्तृत ऑपरेटिंग निर्देश प्रदान करता है।
कल्चर माध्यम तैयार करते समय, पीएच मीटर का उपयोग करके यांत्रिक सरगर्मी के साथ पीएच को आसानी से समायोजित किया जा सकता है। संस्कृति माध्यम को एक कंटेनर (जैसे एक बड़े बीकर) में तैयार किया जाना चाहिए जिसे लगातार हिलाया जा सके। या टेफ्लॉन-लिपटे मैग्नेट। अगर-युक्त माध्यम के पीएच को पिघलने के बाद समायोजित करने की आवश्यकता होती है, जो आसानी से गर्म करने योग्य चुंबकीय स्टिरर के साथ किया जाता है। पीएच को समायोजित करते समय, पहले पीएच मीटर को कैलिब्रेट करने के लिए ज्ञात पीएच के मानक बफर समाधान का उपयोग करें। फिर मिश्रित इलेक्ट्रोड और प्रतिरोध थर्मामीटर (यदि कोई हो) को माध्यम में रखें, धीरे-धीरे इलेक्ट्रोड से दूर बीकर के अंत से उचित मात्रा में हाइड्रोक्लोरिक एसिड और सोडियम हाइड्रॉक्साइड डालें, ताकि माध्यम आवश्यक पीएच तक पहुंच सके और उसे बनाए रख सके।
पीएच मीटर के तापमान मुआवजे को इलेक्ट्रोड सिस्टम पर तापमान के प्रभाव को ध्यान में रखना चाहिए: कुछ तनुकरण और मीडिया में, तापमान के साथ पीएच काफी बदल जाता है। तरल मीडिया और तनुकरण के लिए, पीएच को आमतौर पर 25 डिग्री पर या उस तापमान पर समायोजित और मापा जा सकता है जिस पर उनका उपयोग किया जाता है।
अगर माध्यम का पीएच घुलने के बाद समायोजित किया जाना चाहिए, और घुलने का तापमान 45 डिग्री से ऊपर है: इसलिए, ठोस माध्यम का पीएच उसके उपयोग तापमान पर निर्धारित किया जाना चाहिए। इस समय, एक फ्लैट-हेड मिश्रित इलेक्ट्रोड का उपयोग किया जाना चाहिए, और पीएच मीटर के तापमान मुआवजे को मैन्युअल रूप से कैलिब्रेट किया जाना चाहिए। कल्चर माध्यम तैयार करते समय, यदि यह निर्धारित किया जाता है कि कल्चर माध्यम का पीएच पिघलने की अवस्था और जमने की अवस्था के बीच भिन्न है, तो इसका मतलब है कि पीएच को समायोजित करने में त्रुटि है।
इसी तरह, जब तैयार माध्यम को ताप-निष्फल किया जाता है (उदाहरण के लिए, ऑटोक्लेव्ड), तो इसमें पीएच परिवर्तन भी हो सकता है। निर्जलित माध्यम के लिए, निर्माता ने इसे ध्यान में रखा है, और आमतौर पर पीएच को समायोजित करने की कोई आवश्यकता नहीं है, लेकिन उपयोग किए जाने वाले माध्यम के पीएच की सावधानीपूर्वक जांच की जानी चाहिए। यदि निर्जलित अगर माध्यम के पीएच को पुनर्विघटन या तैयारी के दौरान समायोजित किया जाना चाहिए, तो माध्यम के अत्यधिक गरम होने से बचने के लिए इसे नसबंदी चरण के बाद फिल्टर-स्टरलाइज्ड हाइड्रोक्लोरिक एसिड और सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के साथ समायोजित करना सबसे अच्छा है। विभिन्न कच्चे माल या फार्मास्यूटिकल्स के साथ मीडिया तैयार करते समय, ऑटोक्लेविंग के बाद मीडिया के पीएच की जांच की जानी चाहिए। इसके अलावा, यदि प्रत्येक आटोक्लेव के बाद माध्यम का पीएच समान रूप से बदलता पाया जाता है, तो माध्यम तैयार करते समय पीएच को उचित रूप से समायोजित किया जा सकता है। हालाँकि, नसबंदी के बाद माध्यम का अंतिम पीएच निर्धारित करना अभी भी आवश्यक है।
