ग्लास स्लाइड के लिए ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप मोटाई आवश्यकताएँ
सूक्ष्म निर्जलीकरण और नमूना अनुलग्नक: बार-बार अपकेंद्रित्र के कारण, कोशिकाएं नष्ट हो जाती हैं, इसलिए ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी के लिए कोशिकाओं को ग्लास स्लाइड या प्लास्टिक शीट की सतह से जोड़ना सबसे अच्छा है, ताकि कोशिकाएं निर्जलित हो जाएं और कांच के साथ सूख जाएं स्लाइड या प्लास्टिक शीट. ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी में ग्लास स्लाइड की मोटाई के लिए आवश्यकताएँ कोशिकाओं को ग्लास स्लाइड या प्लास्टिक शीट से जुड़ने की अनुमति देने के लिए, पहले ग्लास स्लाइड या प्लास्टिक शीट पर फिल्म की एक परत बिछाना आवश्यक है। फिल्म बिछाने की विधि इस प्रकार है:
(1) ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी के लिए सबसे सरल तरीका पॉलीविनाइल फॉर्मल (फॉर्मवर) फिल्म की एक पतली परत बिछाना है। साफ की गई स्लाइडों को (0.5-1) प्रतिशत पॉलीविनाइल औपचारिक क्लोरोफॉर्म घोल में भिगोएँ। माहौल में उतार-चढ़ाव आने के बाद स्लाइडों पर एक सफेद फिल्म दिखाई देती है। फिल्म को बदलने के लिए स्लाइड्स को क्लोरोफॉर्म में कई बार हिलाएं। पतला और उपयोग के लिए तैयार.
(2) साफ ग्लास स्लाइड पर 0.1 अक्षांश पॉली-एल-लाइसिन (तैयारी के दौरान 1 मिलीग्राम पॉली-लाइसिन को 1 मिलीलीटर फ़िल्टर किए गए पानी में घोलें) गिराएं, और बूंद के खुलने के बाद इसे 450C आपूर्ति बॉक्स में डाल दें। . सूखा। यह विधि सबसे अच्छी है क्योंकि पॉली-एल-लाइसिन सकारात्मक रूप से चार्ज होती है, जिससे अधिक सतह नकारात्मक चार्ज वाली कोशिकाएं जुड़ पाती हैं।
(3) ग्लिसरॉल प्रोटीन बनाने के लिए स्लाइड की मोटाई के लिए ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप की आवश्यकताओं के अनुसार आसुत जल में (30--40) प्रतिशत और (3-5) प्रतिशत के अनुपात में प्लाज्मा और ग्लिसरॉल मिलाएं। समाधान। तरल को साफ कांच की स्लाइड पर गिराया जाता है, खोला जाता है और ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के नीचे सुखाया जाता है। प्रोटीन को ठीक करने के लिए बिछाई गई प्रोटीन फिल्म को 2 प्रतिशत ग्लूटाराल्डिहाइड में डुबोया जाता है, बाद में उपयोग के लिए धोया और सुखाया जाता है। उपयोग से पहले, प्लाज्मा को प्रोटीन फिल्म पर गिराया जाता है, इसे "सक्रिय" किया जाता है, 30 मिनट के बाद बफर से धोया जाता है, और इसे सीधे लगाया जा सकता है।
स्थिर और साफ की गई कोशिकाओं को एक डिजिटल माइक्रोस्कोप के तहत फ़िल्टर किए गए पानी के साथ सेल सस्पेंशन की उपयुक्त सांद्रता में बनाया जाता है, और ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप को एक ग्लास स्लाइड या प्लास्टिक शीट पर रखा जाता है जिसे एक झिल्ली से ढक दिया जाता है, और एक आर्द्र, निचले स्थान पर रखा जाता है कोशिकाओं को झिल्ली से जुड़ने की अनुमति देने के लिए तापमान (4{7}}C) वातावरण (30-120) मिनट। कांच की स्लाइड को उठाने के लिए बारीक चिमटी का उपयोग करें और इसे साफ डबल आसुत जल में हिलाएं, और एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप से अनासक्त कोशिकाओं को धो लें। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप में स्लाइड की मोटाई के लिए आवश्यकताएं ध्रुवीकरण माइक्रोस्कोप को तुरंत 50 प्रतिशत एसीटोन (या इथेनॉल) से भरे बर्तन में रखा जाता है। निर्जलीकरण प्रक्रिया में स्लाइडों को हर 3 मिनट में बढ़ती सांद्रता के साथ एसीटोन या इथेनॉल में डालना होता है, और ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप या ग्लास स्लाइड कंटेनर में निर्जलीकरण एजेंट की एकाग्रता को लगातार बढ़ाना होता है। लेखक के प्रयोगशाला अनुभव के अनुसार, बाद वाला ऑपरेशन अधिक सुविधाजनक है। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी की विशिष्ट विधि हर 3 मिनट में कंटेनर में आधे डिहाइड्रेटिंग एजेंट को बाहर निकाल सकती है, और फिर 100 प्रतिशत की एकाग्रता के साथ समान मात्रा में डिहाइड्रेटिंग एजेंट जोड़ सकती है। 5-6 ऑपरेशन के बाद, माइक्रोस्कोप मूल्य पोत में निर्जलीकरण एजेंट की एकाग्रता 0.5 प्रतिशत से ऊपर पहुंच जाती है, और कोशिकाएं सफलतापूर्वक निर्जलित हो जाती हैं। महत्वपूर्ण बिंदु पर सूखने के बाद, कांच की स्लाइड या प्लास्टिक शीट को धातु कोटिंग के लिए प्रवाहकीय चिपकने वाले पदार्थ के साथ नमूना घाट पर चिपका दिया जाता है। तीसरी विधि द्वारा कोशिकाओं को झिल्लियों से जोड़ने की भी सुविधा है। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप "सक्रिय" प्रोटीन फिल्म पर ग्लूटाराल्डिहाइड की कम सांद्रता द्वारा स्थिर कोशिकाओं को लटका सकता है। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप को ग्लास स्लाइड की मोटाई को 10 मिनट तक रखने की आवश्यकता होती है, और ग्लास स्लाइड या प्लास्टिक शीट को 2 प्रतिशत ग्लूटाराल्डिहाइड में भिगोया जाता है। 30 मिनट के बाद, फ़िल्टर्ड डबल डिस्टिल्ड वॉटर से कुल्ला करें, और फिर उपरोक्त विधि के अनुसार निर्जलीकरण, सूखा और धातु लेप करें।
