फिल्मों की ऑप्टिकल और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए नमूने तैयार करने की विधियाँ
माइक्रोफिल्मिंग विधि में आम तौर पर चार श्रेणियां शामिल होती हैं: सेक्शनिंग विधि, समग्र सीलिंग विधि, कोटिंग विधि और प्रेसिंग विधि।
①स्लाइस विधि। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप स्लाइस की मोटाई 2 से 25 माइक्रोन के बीच होती है, सामान्य पौधे और पशु सामग्री के लिए, स्लाइस लगभग 10 माइक्रोन मोटी होती है। सेक्शनिंग विधि अलग-अलग एम्बेडिंग एजेंट के अनुसार अलग-अलग होती है। आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली विधियाँ पैराफिन सेक्शनिंग विधि, कॉटन ग्लू सेक्शनिंग विधि, फ्रोजन सेक्शनिंग विधि और ग्लाइकोल मेथैक्रिलेट विधि (जिसे GMA विधि कहा जाता है) हैं। पैराफिन सेक्शनिंग विधि में फिक्सेशन, एम्बेडिंग, सेक्शनिंग, स्टेनिंग, डिहाइड्रेशन और सीलिंग के चरण शामिल हैं। मुख्य बात बायोमटेरियल को पैराफिन वैक्स में एम्बेड करना है, और वैक्स ब्लॉक में डूबे बायोमटेरियल को आदर्श पतले स्लाइस में काटने के लिए पैराफिन वैक्स का उपयोग करना है। ऑपरेशन प्रक्रिया इस प्रकार है: फिक्सेशन → पानी से धोना → कम सांद्रता से उच्च सांद्रता तक कदम-दर-कदम अल्कोहल निर्जलीकरण → ज़ाइलीन पारदर्शिता → मोम विसर्जन → एम्बेडिंग → सेक्शनिंग → पैचिंग → ज़ाइलीन डीवैक्सिंग → उच्च सांद्रता से कम सांद्रता तक कदम-दर-कदम अल्कोहल उपचार, और अंत में पानी में संक्रमण → धुंधलापन → कम सांद्रता से उच्च सांद्रता तक कदम-दर-कदम अल्कोहल निर्जलीकरण → ज़ाइलीन पारदर्शिता → राल चिपकने वाला के साथ सील करना। सभी प्रकार की फिल्म बनाने की तकनीकों में शामिल बुनियादी कदम समान हैं।
② इंटीग्रल सीलिंग विधि। एकल कोशिकाओं, छोटे जीवों या पूरे माउंटेड फिल्म विधि के बिखरे हुए अंगों के लिए उपयोग किया जाता है। इस विधि में फिक्सेशन, धुंधलापन, निर्जलीकरण, पारदर्शिता और सीलिंग के विभिन्न चरणों की भी आवश्यकता होती है। इस विधि का उपयोग लेसविंग्स और कीटों के मुख-भागों की तैयारी के लिए किया जाता है।
स्मीयर विधि। तैयारी की एक विधि जिसमें आसानी से फैलने वाले जैविक नमूने को स्लाइड पर लेपित किया जाता है। रक्त स्मीयर इसका एक उदाहरण है।
④प्रेसिंग विधि। प्राकृतिक, आसानी से फैलने वाले ऊतक या उपचार के बाद आसानी से फैलने वाले ऊतक, जैसे कि पशु शुक्राणुकोशिका, जड़ की नोक की कोशिकाएँ, आदि स्लाइड पर, प्लस एक कवरस्लिप, और फिर ऊतकों को बलपूर्वक कुचल दें, ताकि कोशिकाएँ या इंट्रासेल्युलर संरचनाएँ फिल्मिंग विधियों की एक परत में फैल जाएँ। प्रेस विधि का उपयोग अक्सर गुणसूत्रों का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है, आमतौर पर मैजेंटा एसीटेट, लाइकेन लाल और कार्बोलिक एसिड लाल के साथ दाग दिया जाता है।
