कन्फोकल प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के बारे में ज्ञान
कन्फोकल प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का मूल सिद्धांत: एक बिंदु प्रकाश स्रोत का उपयोग नमूने को विकिरणित करने के लिए किया जाता है, और फोकल विमान पर एक अच्छी तरह से परिभाषित छोटा प्रकाश स्थान बनता है। स्प्लिटर्स से बना है। बीम स्प्लिटर प्रतिदीप्ति को सीधे डिटेक्टर को भेजता है। प्रकाश स्रोत और डिटेक्टर के सामने एक पिनहोल होता है, जिसे क्रमशः रोशनी पिनहोल और डिटेक्शन पिनहोल कहा जाता है। दोनों का ज्यामितीय आकार समान है, लगभग 100-200nm; फोकल तल पर प्रकाश स्थान के सापेक्ष, दोनों संयुग्मित होते हैं, अर्थात, प्रकाश स्थान लेंस की एक श्रृंखला से होकर गुजरता है, और अंत में एक ही समय में रोशनी पिनहोल और डिटेक्शन पिनहोल पर ध्यान केंद्रित किया जा सकता है। इस तरह, फोकल प्लेन से प्रकाश को डिटेक्शन होल के दायरे में परिवर्तित किया जा सकता है, जबकि फोकल प्लेन के ऊपर या नीचे से बिखरी हुई रोशनी डिटेक्शन होल के बाहर अवरुद्ध होती है और इसकी छवि नहीं बनाई जा सकती है। लेजर नमूना को बिंदु दर बिंदु स्कैन करता है, और फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब पिनहोल का पता लगाने के बाद बिंदु दर बिंदु संबंधित प्रकाश बिंदु की कन्फोकल छवि भी प्राप्त करता है, जिसे एक डिजिटल सिग्नल में परिवर्तित किया जाता है और कंप्यूटर में प्रेषित किया जाता है, और अंत में एक स्पष्ट रूप में एकत्रित किया जाता है। स्क्रीन पर पूरे फोकल प्लेन की कन्फोकल छवि।
प्रत्येक फोकल समतल छवि वास्तव में नमूने का एक ऑप्टिकल क्रॉस-सेक्शन है, और इस ऑप्टिकल क्रॉस-सेक्शन में हमेशा एक निश्चित मोटाई होती है, जिसे ऑप्टिकल थिन सेक्शन के रूप में भी जाना जाता है। चूँकि फोकल बिंदु पर प्रकाश की तीव्रता गैर-फोकस बिंदु की तुलना में बहुत अधिक है, और गैर-फोकल समतल प्रकाश को पिनहोल द्वारा फ़िल्टर किया जाता है, कन्फोकल प्रणाली के क्षेत्र की गहराई लगभग शून्य है, और Z के साथ स्कैनिंग होती है -एक्सिस ऑप्टिकल टोमोग्राफी का एहसास कर सकता है, जिससे नमूने के केंद्रित स्थान पर दो-आयामी ऑप्टिकल अनुभाग का निरीक्षण किया जा सकता है। XY प्लेन (फोकल प्लेन) स्कैनिंग को Z-अक्ष (ऑप्टिकल एक्सिस) स्कैनिंग के साथ जोड़कर, निरंतर परतों की दो-आयामी छवियों को जमा करके और विशेष कंप्यूटर सॉफ्टवेयर द्वारा संसाधित करके नमूने की त्रि-आयामी छवि प्राप्त की जा सकती है।
