लेजर स्कैनिंग मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी के बेहतर लाभ
लेजर स्कैनिंग मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी का एक प्रमुख सुधार है, मुख्य रूप से जीवित कोशिकाओं, स्थिर कोशिकाओं और ऊतकों की गहरी संरचना का अवलोकन करने के लिए, और स्पष्ट और तेज बहु-परत जेड-प्लेन संरचनाएं, यानी ऑप्टिकल स्लाइस प्राप्त कर सकता है, और निर्माण कर सकता है नमूने की त्रि-आयामी ठोस संरचना। कन्फोकल माइक्रोस्कोप एक लेजर प्रकाश स्रोत का उपयोग करता है, जिसे ऑब्जेक्टिव लेंस के पूरे रियर फोकल प्लेन को भरने के लिए विस्तारित किया जाता है, और फिर ऑब्जेक्टिव लेंस के लेंस सिस्टम के माध्यम से नमूने के फोकल प्लेन पर एक बहुत छोटे बिंदु में परिवर्तित हो जाता है। ऑब्जेक्टिव लेंस के संख्यात्मक एपर्चर के आधार पर, सबसे चमकदार रोशनी बिंदु का व्यास लगभग 0.25 ~ 0.8 माइक्रोमीटर है, और गहराई लगभग 0.5 ~ 1.5 है μm. कन्फोकल स्पॉट का आकार माइक्रोस्कोप के डिजाइन, लेजर तरंग दैर्ध्य, ऑब्जेक्टिव लेंस की विशेषताओं, स्कैनिंग इकाई की स्थिति सेटिंग और नमूने की प्रकृति पर निर्भर करता है। फील्ड माइक्रोस्कोप में रोशनी की एक बड़ी श्रृंखला और रोशनी की एक बड़ी गहराई होती है, जबकि कन्फोकल माइक्रोस्कोप में रोशनी होती है जो फोकल विमान पर एक फोकल बिंदु पर केंद्रित होती है। कन्फोकल माइक्रोस्कोपी का सबसे बुनियादी लाभ यह है कि यह लगभग 0.5 से 1.5 माइक्रोन की मोटाई के साथ मोटे फ्लोरोसेंट नमूनों (5 {{12 }} माइक्रोमीटर या अधिक तक) का बारीक ऑप्टिकल सेक्शनिंग कर सकता है। माइक्रोस्कोप जेड-अक्ष स्टेपर मोटर के साथ नमूने को ऊपर और नीचे ले जाकर ऑप्टिकल अनुभाग छवियों की एक श्रृंखला प्राप्त की जा सकती है। छवि जानकारी का अधिग्रहण विमान के भीतर नियंत्रित किया जाता है और नमूने पर अन्य स्थानों से संकेतों द्वारा हस्तक्षेप नहीं किया जाएगा। पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति के प्रभाव को हटाने और सिग्नल-टू-शोर अनुपात को बढ़ाने के बाद, पारंपरिक क्षेत्र रोशनी प्रतिदीप्ति छवियों की तुलना में कन्फोकल छवियों के कंट्रास्ट और रिज़ॉल्यूशन में काफी सुधार हुआ है। कई नमूनों में, जटिल प्रणालियों को बनाने के लिए कई जटिल संरचनात्मक घटकों को आपस में जोड़ा जाता है, लेकिन एक बार जब पर्याप्त ऑप्टिकल अनुभाग एकत्र किए जा सकते हैं, तो हम उन्हें सॉफ्टवेयर के माध्यम से 3 डी में फिर से बना सकते हैं। कोशिकाओं या ऊतकों के बीच जटिल संरचनात्मक और कार्यात्मक संबंधों को स्पष्ट करने के लिए जैविक अनुसंधान में इस प्रयोगात्मक दृष्टिकोण का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है।
