एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए ट्यूनल का उपयोग करके फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी के परिणामों को कैसे पढ़ें
1. परिणामों के अवलोकन में तीन बिंदुओं पर ध्यान दें, एपि-प्रोजेक्शन विधि, रिज़ॉल्यूशन प्रोजेक्शन और फ़िल्टर उपचार। विशेष रूप से:
रोशनी विधि आम तौर पर एपिस्कोपिक होती है, यानी, प्रकाश स्रोत को ऑब्जेक्टिव लेंस के माध्यम से नमूने पर प्रक्षेपित किया जाता है;
प्रकाश स्रोत पराबैंगनी प्रकाश है, तरंग दैर्ध्य छोटा है, और रिज़ॉल्यूशन सामान्य सूक्ष्मदर्शी की तुलना में अधिक है;
दो विशेष फिल्टर हैं, प्रकाश स्रोत के सामने वाले का उपयोग दृश्य प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है, और ऐपिस और ऑब्जेक्टिव लेंस के बीच वाले का उपयोग मानव आंखों की सुरक्षा के लिए पराबैंगनी किरणों को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है।
दूसरा, ट्यूनेल द्वारा एपोप्टोसिस को मापने के लिए उपयोग किया जाने वाला फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप भी एक प्रकार का ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप है, मुख्य अंतर यह है कि दोनों की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य अलग-अलग हैं। यह संरचना और उपयोग के संदर्भ में प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के बीच अंतर को निर्धारित करता है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी इम्यूनोफ्लोरेसेंट साइटोकैमिस्ट्री में एक आवश्यक उपकरण है। यह प्रकाश स्रोत, फिल्टर प्लेट सिस्टम और ऑप्टिकल सिस्टम जैसे मुख्य घटकों से बना है। यह प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए नमूने को उत्तेजित करने के लिए प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य का उपयोग करना है, और उद्देश्य लेंस और ऐपिस प्रणाली को बढ़ाकर नमूने की प्रतिदीप्ति छवि का निरीक्षण करना है।
3. ट्यूनेल में एपोप्टोसिस को मापने के लिए प्रतिदीप्ति दबाई गई फिल्टर प्लेट। दबी हुई फिल्टर प्लेट का कार्य उत्तेजना प्रकाश के मार्ग को पूरी तरह से अवरुद्ध करना और संबंधित तरंग दैर्ध्य रेंज में प्रतिदीप्ति प्रदान करना है। उत्तेजना फिल्टर प्लेट के अनुरूप, निम्नलिखित तीन प्रकार की दबाई गई फिल्टर प्लेटें आमतौर पर उपयोग की जाती हैं:
पराबैंगनी प्रकाश दबाने वाली फिल्टर प्लेट: यह दृश्य प्रकाश को पारित कर सकती है और पराबैंगनी प्रकाश को गुजरने से रोक सकती है। यूजी-1 या यूजी-5 के साथ जोड़ा जा सकता है। आमतौर पर उपयोग किया जाने वाला GG-3K430 या GG-6K460।
बैंगनी नीली रोशनी दमन फिल्टर प्लेट: 510 एनएम (हरे से लाल) से ऊपर तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश पारित कर सकती है, और बीजी -12 के साथ जोड़ा जा सकता है। आमतौर पर OG-4K510 या OG-1K530 का उपयोग किया जाता है।
पराबैंगनी प्रकाश दबाने वाली फिल्टर प्लेट: 460 एनएम (नीले से लाल) से ऊपर तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश पारित कर सकती है, इसे बीजी -3 के साथ जोड़ा जा सकता है, आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला ओजी -11 K470AK 490, K510।
