इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप नमूने कैसे तैयार करें
ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए अवलोकन नमूनों की तैयारी के मुख्य तरीके हैं:
1. प्रक्षेपण विधि
वैक्यूम की स्थिति में, मजबूत इलेक्ट्रॉन बिखरने की क्षमता वाले भारी धातु परमाणुओं का उपयोग नमूने की सतह पर स्प्रे करने के लिए किया जाता है। यह नमूने और गैर-छिड़काव वाले क्षेत्र के बीच एक मजबूत विपरीत बनाता है, और गैर-छिड़काव वाला हिस्सा नमूने का प्रक्षेपण बन जाता है। प्रक्षेपण के अनुसार, हम नमूने के त्रि-आयामी आकार और ऊंचाई को समझ सकते हैं। इस विधि का उपयोग आमतौर पर बैक्टीरियल फ्लैगेला या वायरस कणों का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है।
2. नकारात्मक धुंधलापन विधि
क्योंकि यह विधि नमूने को उजागर करने के लिए नमूने की पृष्ठभूमि को धुंधला करती है, इसे नकारात्मक धुंधलापन कहा जाता है। आम तौर पर, नमूना उच्च इलेक्ट्रॉन घनत्व वाले पदार्थों से घिरा होता है जो कोई संरचना नहीं दिखाते हैं और नमूने के साथ प्रतिक्रिया नहीं करते हैं, जैसे कि फॉस्फोटंगस्टिक एसिड का सोडियम नमक। उसी समय, डाई को अवलोकन वस्तु के अंदरूनी हिस्से में भी डाला जाता है। इस तरह, यह न केवल आकार प्रदर्शित कर सकता है बल्कि एक निश्चित सीमा तक नमूने की आंतरिक संरचना को भी दर्शा सकता है। इस विधि का उपयोग करके जीवाणु कोशिकाओं, वायरस आदि का अवलोकन किया जा सकता है।
3. अल्ट्राथिन सेक्शनिंग विधि
यह सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली विधि है क्योंकि यह कोशिकाओं या अन्य नमूनों के अंदर की बारीक संरचनाओं को देखने की अनुमति देती है। आम तौर पर, नमूने को एक निश्चित प्रक्रिया के अनुसार स्थिर और निर्जलित किया जाना चाहिए, फिर एक समर्थन के रूप में राल में एम्बेड किया जाना चाहिए, और एक अल्ट्रामाइक्रोटोम का उपयोग करके बेहद पतले स्लाइस में काटा जाना चाहिए। क्योंकि ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप से केवल 20 से 100 नैनोमीटर की मोटाई वाले स्लाइस ही देखे जा सकते हैं, सामान्य जीवाणु नमूनों में, एक कोशिका को 10 से 50 टुकड़ों में विभाजित किया जाना चाहिए।
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