सही प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप कैसे चुनें
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप प्रयोगशालाओं और पैथोलॉजी विभागों के लिए एक मानक सूक्ष्म इमेजिंग उपकरण है। यह अवलोकन और इमेजिंग के लिए प्रतिदीप्ति विशेषताओं का उपयोग करता है। इसका व्यापक रूप से कोशिका जीव विज्ञान, तंत्रिका जीव विज्ञान, वनस्पति विज्ञान, सूक्ष्म जीव विज्ञान, विकृति विज्ञान, आनुवंशिकी और अन्य क्षेत्रों में उपयोग किया जाता है। प्रतिदीप्ति इमेजिंग में उच्च संवेदनशीलता और उच्च विशिष्टता के फायदे हैं, और यह ऊतकों और कोशिकाओं में विशिष्ट प्रोटीन और ऑर्गेनेल के वितरण के अवलोकन, कोलोकलाइज़ेशन और इंटरैक्शन के अध्ययन, आयन एकाग्रता परिवर्तन जैसी जीवन गतिशील प्रक्रियाओं की ट्रैकिंग के लिए बहुत उपयुक्त है। , वगैरह।
माइक्रोस्कोप का चयन
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी मुख्य रूप से तीन श्रेणियों में विभाजित हैं: सीधे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी (विभाजन के लिए उपयुक्त), उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी (सेक्शनिंग को ध्यान में रखते हुए जीवित कोशिकाओं के लिए उपयुक्त), त्रिविम प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी (बड़े नमूनों के लिए उपयुक्त, जैसे पौधे, जेब्राफिश (वयस्क/वयस्क) भ्रूण), मेडका, चूहे/चूहे के अंग, आदि)।
प्रतिदीप्ति फ़िल्टर क्यूब्स का चयन
फ्लोरोसेंट जांच के उत्तेजना और उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य पर विचार करने के अलावा, फिल्टर ब्लॉकों के चयन में यह भी विचार करने की आवश्यकता है कि क्या बहु-रंग लेबल वाले नमूनों के लिए गैर-विशिष्ट उत्तेजना और क्रॉस-रंग है। प्रयोग में, हम उत्तेजना के लिए उत्तेजना शिखर के निकटतम तरंग दैर्ध्य को चुनने का प्रयास करेंगे, और प्राप्त सीमा में उत्सर्जन शिखर शामिल होना चाहिए। उदाहरण के लिए, एलेक्सा फ्लोर 488 का उत्तेजना शिखर 500nm है, और एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप में 480/40 उत्तेजना फ़िल्टर का चयन किया जा सकता है। आमतौर पर प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में उपयोग किए जाने वाले प्रतिदीप्ति फिल्टर क्यूब्स को दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है: लॉन्ग पास (शॉर्ट के लिए एलपी) और बैंड पास (शॉर्ट के लिए बीपी), जिसे जरूरतों के अनुसार चुनने की भी आवश्यकता होती है।
फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत का चयन
वर्तमान में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोतों में पारा लैंप, मेटल हैलाइड लैंप और एलईडी प्रकाश स्रोत शामिल हैं जो हाल के वर्षों में तेजी से विकसित हुए हैं। फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत का स्पेक्ट्रम निरंतर और असंतत है, और ऊर्जा विभिन्न बैंडों में भिन्न होगी। अपने अपेक्षाकृत संकीर्ण वर्णक्रमीय बैंड, अधिक स्थिर ऊर्जा उत्पादन, लंबे जीवनकाल, सुरक्षा और पर्यावरण संरक्षण और कई अन्य फायदों के कारण, एलईडी प्रकाश स्रोत धीरे-धीरे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का मुख्य प्रकाश स्रोत बन रहा है।
कन्फोकल माइक्रोस्कोप
पारंपरिक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप अवलोकन में, फ्लोरोसेंट मार्कर पदार्थों और ऑटोफ्लोरेसेंस संरचनाओं के ओवरलैपिंग के कारण, वे बारीकी से संयुक्त होते हैं, जबकि पारंपरिक एपि-फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप उद्देश्य लेंस न केवल फोकल विमान से प्रकाश एकत्र करता है, बल्कि ऊपर और नीचे बिखरे हुए प्रकाश को भी एकत्र करता है। फ़ोकल प्लेन, जिसके परिणामस्वरूप छवि रिज़ॉल्यूशन और कंट्रास्ट बहुत कम हो जाता है।
कन्फोकल इमेजिंग केवल फोकल तल से परावर्तित प्रकाश के हिस्से का पता लगाकर इस समस्या का समाधान करती है। प्रकाश स्रोत फोकल तल पर एक छोटा और बढ़िया प्रकाश स्थान बनाने के लिए एक पिनहोल से होकर गुजरता है। फोकल तल से उत्सर्जित प्रकाश को ऑब्जेक्टिव लेंस द्वारा एकत्र किया जाता है। अभिदृश्यक लेंस के फोकल तल के ऊपर या नीचे बिंदु से उत्सर्जित अधिकांश प्रतिदीप्ति छोटे छेद में परिवर्तित नहीं हो पाती है। केवल फोकल विमान में स्थित प्रतिदीप्ति और ऑफ-फोकस प्रतिदीप्ति का एक छोटा सा हिस्सा पिनहोल से गुजर सकता है, जबकि फोकल विमान के बाहर प्रकाश किरणें पिनहोल प्लेट के सामने या पीछे एकत्रित होती हैं और डिटेक्टर के माध्यम से प्रवेश करने से अवरुद्ध हो जाती हैं। पिनहोल. पता लगाई गई छवि फोकल प्लेन की छवि है, इसलिए अंतिम छवि गुणवत्ता में काफी सुधार हुआ है।
लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोप के कार्यों के फायदे और व्यावहारिकता के कारण, कन्फोकल माइक्रोस्कोप उच्च परिशुद्धता कोशिका जीव विज्ञान, वनस्पति विज्ञान और कोशिका अनुसंधान के क्षेत्र में एक अनिवार्य प्रयोगात्मक सहायक है। साथ ही, भविष्य के वैज्ञानिक अनुसंधान केंद्र में, यह सबसे बुनियादी और मुख्य वैज्ञानिक अनुसंधान उपकरण होगा।
