उल्टे माइक्रोस्कोप और प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के बीच चयन कैसे करें?
कोशिका संवर्धन और संबंधित व्युत्पन्न प्रयोगों में, माइक्रोस्कोप एक बहुत ही महत्वपूर्ण उपकरण है। वर्तमान समय में बाज़ार में विभिन्न प्रकार के सूक्ष्मदर्शी उपलब्ध हैं। ऐसा माइक्रोस्कोप चुनना एक चुनौती है जो ज़रूरतों को पूरा करता हो और लागू हो। निम्नलिखित उल्टे सूक्ष्मदर्शी और प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के सिद्धांतों का परिचय है, ताकि आप आसानी से चयन कर सकें।
उल्टे माइक्रोस्कोप की संरचना सामान्य माइक्रोस्कोप के समान ही होती है, जिसमें मुख्य रूप से तीन भाग शामिल होते हैं: यांत्रिक भाग, प्रकाश भाग और ऑप्टिकल भाग। उल्टे माइक्रोस्कोप की संरचना सामान्य ईमानदार माइक्रोस्कोप के समान ही होती है, सिवाय इसके कि ऑब्जेक्टिव लेंस और रोशनी प्रणाली उलट जाती है, पहला स्टेज के नीचे होता है, और दूसरा स्टेज के ऊपर होता है। ऐसी संरचना रोशनी संकेंद्रित प्रणाली और मंच के बीच प्रभावी दूरी को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ा सकती है, जो देखने के लिए मोटी वस्तुओं को रखने के लिए सुविधाजनक है, जैसे कि कल्चर व्यंजन और सेल कल्चर बोतलें (बेशक, ग्लास स्लाइड आदि भी उपलब्ध हैं) , और साथ ही, ऑब्जेक्टिव लेंस और सामग्री के बीच की दूरी, उनके बीच की कार्यशील दूरी बहुत बड़ी नहीं होनी चाहिए। उल्टे सूक्ष्मदर्शी का उपयोग चिकित्सा और स्वास्थ्य इकाइयों, उच्च शिक्षा संस्थानों और अनुसंधान संस्थानों में सूक्ष्मजीवों, कोशिकाओं, बैक्टीरिया, ऊतक संस्कृति, निलंबन, तलछट आदि के अवलोकन के लिए किया जाता है। यह संवर्धन माध्यम में कोशिकाओं, जीवाणुओं आदि के प्रजनन और विभाजन की प्रक्रिया का लगातार निरीक्षण कर सकता है और इस प्रक्रिया में किसी भी रूप की तस्वीरें ले सकता है। इसका व्यापक रूप से कोशिका विज्ञान, परजीवी विज्ञान, ऑन्कोलॉजी, इम्यूनोलॉजी, आनुवंशिक इंजीनियरिंग, औद्योगिक सूक्ष्म जीव विज्ञान, वनस्पति विज्ञान और अन्य क्षेत्रों में उपयोग किया जाता है।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग कोशिकाओं में पदार्थों के अवशोषण और परिवहन, रासायनिक पदार्थों के वितरण और स्थानीयकरण आदि का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। निरीक्षण के तहत वस्तु के लिए, प्रतिदीप्ति उत्पन्न करने के दो तरीके हैं: ऑटोफ्लोरेसेंस, जो पराबैंगनी विकिरण के बाद सीधे प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है रोशनी; कोशिकाओं में कुछ पदार्थ, जैसे क्लोरोफिल, पराबैंगनी किरणों द्वारा विकिरणित होने के बाद ऑटोफ्लोरेसेंस उत्पन्न करते हैं; हालाँकि कुछ पदार्थ स्वयं प्रतिदीप्ति नहीं कर सकते हैं, वे पराबैंगनी किरणों द्वारा विकिरणित होने के बाद फ्लोरोसेंट रंगों या फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ दागने के बाद द्वितीयक प्रतिदीप्ति भी उत्सर्जित कर सकते हैं। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप उत्तेजना प्रकाश के रूप में फिल्टर प्रणाली के माध्यम से एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (पराबैंगनी प्रकाश 365 एनएम या बैंगनी नीली रोशनी 420 एनएम) के प्रकाश को उत्सर्जित करने के लिए उच्च चमकदार दक्षता के साथ एक बिंदु प्रकाश स्रोत का उपयोग करता है, और नमूने में फ्लोरोसेंट पदार्थों को उत्तेजित करने के बाद विभिन्न प्रकार के प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। रंग, फिर अवलोकन वस्तुनिष्ठ लेंस और ऐपिस के आवर्धन के माध्यम से किया जाता है। इस तरह, एक मजबूत कंट्रास्ट पृष्ठभूमि के तहत, भले ही प्रतिदीप्ति बहुत कमजोर हो, इसे पहचानना आसान है और इसमें उच्च संवेदनशीलता है। इसका उपयोग मुख्य रूप से कोशिका संरचना और कार्य और रासायनिक संरचना के अनुसंधान के लिए किया जाता है।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी को ट्रांसमिशन प्रकार और एपी-इजेक्शन प्रकार में विभाजित किया गया है, पहला अधिक आदिम है और दूसरा अधिक उन्नत है। दो प्रकार के प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी की मूल संरचना समान है, मुख्य अंतर यह है: संचरण प्रकार का उत्तेजना प्रकाश नमूने से होकर गुजरता है, और पूरा नमूना प्रतिदीप्ति उत्पन्न करता है, जो फिर उद्देश्य लेंस में प्रवेश करता है। आवर्धन जितना अधिक होगा, प्रतिदीप्ति उतनी ही कमजोर होगी; एपि-उत्सर्जन प्रकार का उत्तेजना प्रकाश नमूने की सतह पर प्रक्षेपित होता है, नमूने की सतह प्रतिदीप्ति पैदा करती है, और प्रतिदीप्ति फिर से उद्देश्य लेंस में प्रवेश करती है। आवर्धन जितना अधिक होगा, प्रतिदीप्ति उतनी ही मजबूत होगी, जो उच्च-आवर्धन अवलोकन के लिए उपयुक्त है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के मुख्य घटकों में एक पारा लैंप प्रकाश स्रोत, एक उत्तेजना फिल्टर प्लेट, एक डाइक्रोइक दर्पण (एपिसोड प्रकार), एक दबाया हुआ फिल्टर प्लेट, और एक डार्क फील्ड कंडेनसर (ट्रांसमिशन प्रकार), आदि शामिल हैं। पारा लैंप की गंभीर गर्मी उत्पन्न होती है, उनमें से अधिकांश गर्मी-अवशोषित फिल्टर से भी सुसज्जित होते हैं। कुछ प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में चरण विपरीत उद्देश्य और कुंडलाकार डायाफ्राम भी होते हैं, इसलिए चरण विपरीत अवलोकन संभव हैं। ऐसे फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप भी हैं जो एक उलटी संरचना अपनाते हैं, दूसरा उल्टा माइक्रोस्कोप, इत्यादि।
इसके अलावा, उपर्युक्त माइक्रोस्कोप को एक सीसीडी स्थापित करके एक डिजिटल माइक्रोस्कोप में इकट्ठा किया जा सकता है, जो माइक्रोस्कोप द्वारा देखी गई भौतिक छवि को डिजिटल-से-एनालॉग रूपांतरण के माध्यम से कंप्यूटर पर एक छवि में परिवर्तित करता है। इसलिए, हम सूक्ष्म क्षेत्र पर अनुसंधान को पारंपरिक सामान्य दूरबीन अवलोकन से प्रदर्शन पर पुनरुत्पादन में बदल सकते हैं, जिससे कार्य कुशलता में सुधार होगा।
