आप प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के बारे में कितना जानते हैं?

आप प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के बारे में कितना जानते हैं?

प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी आमतौर पर उत्तेजना प्रकाश स्रोतों के रूप में उच्च तीव्रता वाले पारा लैंप का उपयोग करते हैं। फ़िल्टर का उपयोग अवांछित प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए किया जाता है, जिससे केवल उच्च तीव्रता, शुद्ध प्रकाश बचता है जो फ्लोरोफोर को उत्तेजित करता है। मोनोक्रोमैटिक प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस के माध्यम से नमूने को विकिरणित करने के बाद, नमूना प्रकाश (प्रतिदीप्ति) उत्सर्जित करने के लिए उत्साहित होगा, और प्रतिदीप्ति और उत्तेजना प्रकाश दोनों वस्तुनिष्ठ लेंस के ऑप्टिकल पथ के साथ वापस आ जाएंगे। इस मामले में, उत्तेजना प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए एक डाइक्रोइक दर्पण की आवश्यकता होती है। , केवल प्रतिदीप्ति को हमें देखने की आवश्यकता है।

यह प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के प्रकाश पथ के साथ नेत्रिका तक पहुंचती है, और फिर हमारी आंखों में प्रवेश करती है, जहां हम फ्लोरोफोर द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति को देख सकते हैं।

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप की पूर्व जांच और समायोजन:
(1) प्रत्येक प्रतिदीप्ति अवलोकन से पहले, प्रतिदीप्ति उपकरण के फिलामेंट संरेखण, ऑप्टिकल पथ फोकस, एपर्चर डायाफ्राम और फ़ील्ड डायाफ्राम सेटिंग्स की नियमित जांच करना आवश्यक है।

(2) क्या कनवर्टर में आवश्यक प्रतिदीप्ति उत्तेजना/उत्सर्जन फिल्टर असेंबली स्थापित की गई है, क्या प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप ऑब्जेक्टिव लेंस ठीक से कॉन्फ़िगर किया गया है, और ऑब्जेक्टिव लेंस के सामने के लेंस पर तेल के दाग और धूल को हटा दें।

(3) यदि संचरित प्रकाश का चरण कंट्रास्ट अवलोकन एक ही समय में किया जाता है, तो कंडेनसर के केंद्र और ऑब्जेक्टिव लेंस के विपरीत चरण कंट्रास्ट रिंग के संयुग्मन की जांच करना आवश्यक है।

(4) जांचें कि क्या नमूना वाहक (स्लाइड ग्लास, कवर ग्लास और अन्य बर्तन) तरल या धूल से ढका हुआ है, और क्या मोटाई ऑब्जेक्टिव लेंस की कैलिब्रेटेड कार्य दूरी सीमा के भीतर है। कटा हुआ नमूना बहुत मोटा नहीं होना चाहिए, अधिमानतः 10 माइक्रोमीटर से कम या उसके बराबर।

(5) क्योंकि प्रकाश स्रोत में पराबैंगनी किरणें होती हैं, पराबैंगनी किरणों को रेटिना को नुकसान पहुंचाने से रोकने के लिए मंच के सामने एक भूरे रंग की प्रकाश-परिरक्षण प्लेट लगाई जाती है।

(6) वोल्टेज अस्थिरता उच्च दबाव पारा लैंप की सेवा जीवन को कम कर देगी, और प्रकाश स्रोत बिजली की आपूर्ति वोल्टेज स्टेबलाइजर से सुसज्जित है।

(7) पारा लैंप के जीवन को बढ़ाने के लिए, इसे चालू करने के 15 मिनट बाद बंद किया जा सकता है; एक बार जब पारा लैंप की फ्लोरोसेंट शक्ति बंद हो जाती है, तो पारा वाष्प को ठंडा करने और मूल स्थिति में लौटने के लिए इसे फिर से शुरू करने के लिए कम से कम 10 मिनट इंतजार करना पड़ता है, अन्यथा लैंप का जीवन प्रभावित होगा।

प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी द्वारा छवि अवलोकन:
(1) फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत को चालू करने के लगभग 5-10 मिनट बाद, उत्तेजना प्रकाश की तीव्रता स्थिर हो जाती है, और नमूना अवलोकन के लिए लोड किया जाता है; वस्तुओं पर ध्यान केंद्रित करने और खोजने की प्रक्रिया के दौरान अत्यधिक उत्तेजना प्रकाश के कारण नमूने की प्रतिदीप्ति शमन को रोकने के लिए, पहले प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप को ज़ूम आउट करें, एपर्चर डायाफ्राम के साथ उत्तेजना प्रकाश को मध्यम तीव्रता तक समायोजित करें या एक एनडी फ़िल्टर जोड़ें, और नमूना चरण को नियमित रूप से स्थानांतरित करें। दर्पण छवि की पुष्टि करने के बाद, शूटिंग और रिकॉर्डिंग के लिए फ्लोरोसेंट स्थिति में समायोजित करें।

(2) खराब छवि गुणवत्ता के लिए समायोजन। नमूना तैयार करने के कारकों के अलावा, जो आवश्यक समायोजन किए जा सकते हैं वे हैं:

① इमेजिंग ऑप्टिकल पथ में प्रकाश-परिरक्षण या प्रकाश-सीमित उपकरणों को बाहर करें, जैसे डीआईसी सहायक उपकरण, एनडी फिल्टर इत्यादि।

②प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के रिसीवर फोकस और एपर्चर डायाफ्राम आकार को फिर से समायोजित करें।

③ प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप ऑब्जेक्टिव लेंस के कवरेज अंतर सुधार रिंग को सावधानीपूर्वक समायोजित करें।

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के अनुप्रयोग बिंदु
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी "एक्टिनिक प्रतिदीप्ति" इमेजिंग का उपयोग करती है। यदि चयनित उत्तेजना तरंग दैर्ध्य निकट-पराबैंगनी क्षेत्र (320-400nm) में है, जो नग्न आंखों के लिए अदृश्य है, तो प्रतिदीप्ति का उत्सर्जन स्पेक्ट्रम सामान्य प्रकाश दर्पण प्रकाश स्रोतों की औसत तरंग दैर्ध्य से भी कम है। सुधार करना। उच्च-ऊर्जा फोटॉन इलेक्ट्रॉनों से टकराते हैं, जिससे इलेक्ट्रॉन जमीनी अवस्था से उत्तेजित अवस्था में परिवर्तित हो जाते हैं। उत्तेजित अवस्था में इलेक्ट्रॉन बहुत अस्थिर होते हैं और वापस ज़मीनी अवस्था में आ जाते हैं। इस प्रक्रिया में, तापीय ऊर्जा का कुछ हिस्सा खर्च हो जाएगा और नए फोटॉन उत्सर्जित होंगे। नए फोटॉन में मूल फोटॉन की तुलना में कम ऊर्जा होती है और इसलिए इसकी तरंग दैर्ध्य लंबी होती है। चूँकि नया फोटॉन तरंग दैर्ध्य आपतित प्रकाश के फोटॉन तरंग दैर्ध्य से भिन्न होता है, विभिन्न तरंग दैर्ध्य वाले प्रकाश की दो किरणों को एक निश्चित ऑप्टिकल प्रसंस्करण विधि द्वारा अलग किया जाता है, ताकि हम केवल उत्सर्जित नए फोटॉन (प्रतिदीप्ति संकेत) देख सकें, अर्थात, प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी प्रतिदीप्ति छवियाँ देखता है।