आप अपने लिए सही कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप कैसे चुन सकते हैं? क्या कोई खास तरीका है?

आप अपने लिए सही कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप कैसे चुन सकते हैं? क्या कोई खास तरीका है?

वाइडफील्ड माइक्रोस्कोपी की तुलना में कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के अधिक फायदे हैं। कन्फोकल माइक्रोस्कोपी नमूनों की निरंतर ऑप्टिकल सेक्शनिंग कर सकती है और गैर-फोकल विमानों से सिग्नल हस्तक्षेप को बाहर कर सकती है। इस कारण से, कन्फोकल माइक्रोस्कोपी का प्रयोग वास्तव में अधिक सामान्य है। हालांकि, बाजार में अधिक से अधिक मुखर सूक्ष्मदर्शी हैं। कैसे चुने?

वाइडफील्ड माइक्रोस्कोपी की तुलना में कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के अधिक फायदे हैं। कन्फोकल माइक्रोस्कोपी नमूनों के निरंतर ऑप्टिकल खंड बना सकता है और गैर-फोकल विमानों से सिग्नल हस्तक्षेप को बाहर कर सकता है। इस कारण से, कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी वास्तव में अधिक सामान्य है। हालांकि, बाजार में अधिक से अधिक मुखर सूक्ष्मदर्शी हैं। कैसे चुने? कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप का चयन करते समय, दो बुनियादी और महत्वपूर्ण विचार होते हैं: जिस प्रकार के नमूने का आप अध्ययन करना चाहते हैं (जैसे, निश्चित या जीवित कोशिकाएं), और जिस प्रकार की परख आप करना चाहते हैं (जैसे, स्थिर या गतिशील सेलुलर प्रक्रियाएं)।

निश्चित कोशिकाओं की कन्फोकल इमेजिंग

निश्चित और दागदार कोशिकाओं या ऊतकों की छवि के लिए, हम आम तौर पर लेजर स्कैनिंग कन्फोकल (एलएससीएम) चुनते हैं। यह मुख्य रूप से इसलिए है क्योंकि निश्चित मृत कोशिकाओं में जीवित कोशिकाओं में तेजी से जैविक घटनाओं की कमी होती है और एलएससीएम के उच्च स्थानिक संकल्प से बेहतर लाभ हो सकता है। एलएससीएम इमेजिंग लेजर द्वारा नमूना को वैकल्पिक रूप से टुकड़ा करना है, और स्कैनिंग गति (स्कैनिंग सरणी दर्पण की गति के आधार पर) आम तौर पर 1fps होती है। लंबे समय तक एक्सपोजर का मतलब फोटोब्लीचिंग का अधिक जोखिम है, लेकिन निश्चित मृत कोशिकाओं के लिए समय महत्वपूर्ण नहीं है और हम कई तस्वीरें लेकर इसे औसत कर सकते हैं।

जीवित कोशिकाओं की कन्फोकल इमेजिंग

लाइव कोशिकाओं की इमेजिंग के लिए अमित्र वातावरण से अतिरिक्त सुरक्षा की आवश्यकता होती है। इमेजिंग करते समय, हमारा पहला विचार सेल की व्यवहार्यता और स्वास्थ्य को बनाए रखना है। विशेष रूप से समय चूक अध्ययन के लिए लगातार तापमान ताप तत्व और छिड़काव प्रणाली आवश्यक हैं। जीवित कोशिकाओं की शारीरिक स्थिति को नियंत्रित करने वाली तेज़ जैव रासायनिक घटनाएं वही हैं जो अधिकांश लोग अध्ययन करना चाहते हैं, लेकिन ये घटनाएं पारंपरिक एलएससीएम के लिए बहुत तेज़ हैं। इसके अलावा, एलएससीएम के लंबे समय तक संपर्क ने भी कोशिकाओं को विषाक्त प्रकाश क्षति को प्रेरित किया। इसलिए, जीवित कोशिकाओं की इमेजिंग के लिए विशेष कॉन्फोकल सूक्ष्मदर्शी की आवश्यकता होती है।

जीवित कोशिकाओं की कन्फोकल इमेजिंग के लिए आमतौर पर दो विकल्प होते हैं: फास्ट स्कैनिंग लेजर स्कैनिंग कॉन्फोकल और स्पिनिंग डिस्क कॉन्फोकल। फास्ट स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोपी धीमी गैल्वेनोमीटर दर्पणों को तेज गुंजयमान स्कैनिंग दर्पणों के साथ बदल देता है, जिससे 30fps तक की स्कैनिंग गति सक्षम हो जाती है; जबकि स्पिनिंग डिस्क कॉन्फोकल (एसडीसीएम) में तेजी से स्कैनिंग का लाभ होता है (हालांकि अनिवार्य रूप से एक हानि स्थानिक संकल्प पर), इसकी गति सैद्धांतिक रूप से 2000fps तक पहुंच सकती है (व्यवहार में यह अक्सर अन्य कारकों द्वारा सीमित होती है)।

यदि आप फोटोब्लीचिंग या बहुत कमजोर फ्लोरेसेंस सिग्नल के बारे में चिंतित हैं, तो एसडीसीएम अधिक उपयुक्त हो सकता है। एसडीसीएम उत्तेजना प्रकाश को फैलाने के लिए सरणी माइक्रोवेल्स के साथ दो घूर्णन डिस्क का उपयोग करता है। एलएससीएम के विपरीत, जो नमूना स्थान को स्कैन करता है, एसडीसीएम एक बार में कई स्पॉट (लगभग 100 पिक्सेल स्पॉट) प्राप्त करता है, इसलिए गति बहुत बढ़ जाती है, और एसडीसीएम की फोटोब्लीचिंग और कम फोटोटॉक्सिसिटी होती है। हालाँकि, आप अत्यधिक संवेदनशील डिटेक्टरों के साथ संयुक्त स्कैनिंग गति को बढ़ाने के लिए तेज़ स्कैनिंग कॉन्फोकल का भी उपयोग कर सकते हैं, और फोटोटॉक्सिसिटी को कम करने के लिए उत्तेजना प्रकाश ऊर्जा को कम कर सकते हैं, जो पारंपरिक कॉन्फोकल के समृद्ध कार्यों को बनाए रख सकता है।

स्वचालित कन्फोकल इमेजिंग सिस्टम

कुछ शोधकर्ता अपनी व्यक्तिगत आवश्यकताओं के अनुरूप सूक्ष्मदर्शी को संशोधित करने के तरीके खोजना पसंद करते हैं। और कुछ शोधकर्ताओं को इस बात में भी दिलचस्पी नहीं है कि सूक्ष्मदर्शी वास्तव में कैसे काम करते हैं। उत्तरार्द्ध के लिए, एक स्वचालित कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप उनकी पसंद के हिसाब से अधिक हो सकता है। उदाहरण के लिए, ओलिंप FluoViewFV10i एक ऐसा पूर्णतः स्वचालित डेस्कटॉप 4-लेजर कन्फोकल माइक्रोस्कोप है। इसकी कॉम्पैक्ट एकीकृत संरचना के लिए लगभग कोई स्थापना स्थान की आवश्यकता नहीं है। इस प्रकार का उपकरण उन शोधकर्ताओं के लिए आदर्श है, जिन्हें हर दिन बहुत अधिक छवि डेटा अधिग्रहण करने की आवश्यकता होती है, लेकिन निश्चित रूप से वे पारंपरिक कन्फोकल की कार्यक्षमता और लचीलेपन को पूरी तरह से प्रतिबिंबित नहीं करते हैं। इसके अलावा, NikonA1 भी पूरी तरह से स्वचालित कॉन्फोकल सिस्टम है। अधिकांश पारंपरिक कन्फोकल स्कैनिंग माइक्रोस्कोप की तरह, NikonA1 एक गैल्वेनोमीटर स्कैन हेड का उपयोग करता है, जिसमें हाइब्रिड स्कैन हेड के साथ A1R की तुलना में उच्च रिज़ॉल्यूशन होता है, लेकिन थोड़ी धीमी गति (A1R ~30fps)