ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का प्रतिदीप्ति अवलोकन
प्रतिदीप्ति उस प्रक्रिया को संदर्भित करती है जिसमें एक फ्लोरोसेंट पदार्थ लगभग एक साथ लंबी तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश उत्सर्जित करता है जब इसे एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (चित्र 1) के प्रकाश से विकिरणित किया जाता है। जब एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (उत्तेजना तरंग दैर्ध्य) का प्रकाश एक अणु से टकराता है, जैसे कि फ्लोरोफोर में, तो फोटॉन ऊर्जा अणु के इलेक्ट्रॉनों द्वारा अवशोषित हो जाती है। इसके बाद, इलेक्ट्रॉन जमीनी अवस्था (S0) से उच्च ऊर्जा स्तर, उत्तेजित अवस्था (S1') में परिवर्तित हो जाते हैं। इस प्रक्रिया को उत्तेजना① कहा जाता है। इलेक्ट्रॉन उत्तेजित अवस्था में 10-9–10-8 सेकंड तक रहता है, जिसके दौरान इलेक्ट्रॉन कुछ ऊर्जा खो देता है②। इलेक्ट्रॉनों की उत्तेजित अवस्था (S1) को छोड़ने और जमीनी अवस्था में लौटने की प्रक्रिया के दौरान, उत्तेजना प्रक्रिया के दौरान अवशोषित शेष ऊर्जा निकल जाती है।
फ्लोरोसेंट जब्लोन्स्की आरेख
उत्तेजित अवस्था में फ्लोरोसेंट अणु का निवास समय प्रतिदीप्ति जीवनकाल है, जो आम तौर पर नैनोसेकंड स्तर पर होता है, और फ्लोरोसेंट अणु की एक अंतर्निहित विशेषता है। प्रतिदीप्ति लाइफटाइम इमेजिंग (एफएलआईएम), जो प्रतिदीप्ति लाइफटाइम इमेजिंग तकनीक का उपयोग करता है, प्रतिदीप्ति तीव्रता इमेजिंग के अलावा अधिक गहराई से कार्यात्मक माप कर सकता है, और आणविक संरचना, अंतर-आणविक इंटरैक्शन और अणुओं के सूक्ष्म वातावरण आदि प्राप्त कर सकता है। जानकारी प्राप्त करना मुश्किल है पारंपरिक ऑप्टिकल इमेजिंग से प्राप्त करें।
प्रतिदीप्ति का एक अन्य महत्वपूर्ण गुण स्टोक्स शिफ्ट है, उत्तेजना और उत्सर्जन शिखर के बीच तरंग दैर्ध्य का अंतर (चित्रा 2)। आमतौर पर उत्सर्जन तरंगदैर्घ्य उत्तेजना तरंगदैर्घ्य से अधिक लंबा होता है। ऐसा इसलिए है क्योंकि फ्लोरोसेंट पदार्थ के उत्तेजित होने के बाद और फोटॉन जारी करने से पहले विश्राम प्रक्रिया के माध्यम से इलेक्ट्रॉन अपनी ऊर्जा का कुछ हिस्सा खो देंगे। बड़े स्टोक्स शिफ्ट वाले फ्लोरोसेंट पदार्थों को फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप के तहत देखना आसान होता है।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप है जो अवलोकन और इमेजिंग के लिए प्रतिदीप्ति गुणों का उपयोग करता है, और कोशिका जीव विज्ञान, तंत्रिका जीव विज्ञान, वनस्पति विज्ञान, सूक्ष्म जीव विज्ञान, विकृति विज्ञान और आनुवंशिकी जैसे विभिन्न क्षेत्रों में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। प्रतिदीप्ति इमेजिंग में उच्च संवेदनशीलता और उच्च विशिष्टता के फायदे हैं, और यह ऊतकों और कोशिकाओं में विशिष्ट प्रोटीन और ऑर्गेनेल के वितरण के अवलोकन, कोलोकलाइज़ेशन और इंटरैक्शन के अध्ययन, आयन एकाग्रता परिवर्तन जैसी जीवन गतिशील प्रक्रियाओं की ट्रैकिंग के लिए बहुत उपयुक्त है। , वगैरह।
कोशिकाओं में अधिकांश अणु प्रतिदीप्त नहीं होते हैं, और यदि आप उन्हें देखना चाहते हैं, तो आप उन्हें प्रतिदीप्त रूप से लेबल करते हैं। फ्लोरोसेंट लेबलिंग के कई तरीके हैं, जैसे प्रत्यक्ष लेबलिंग (जैसे डीएनए को लेबल करने के लिए डीएपीआई का उपयोग करना), या एंटीबॉडी के एंटीजन-बाइंडिंग गुणों का उपयोग करके इम्यूनोस्टेनिंग, या लक्ष्य प्रोटीन को लेबल करने के लिए फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जैसे जीएफपी, ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन) का उपयोग करना। , और प्रतिवर्ती बंधन। सिंथेटिक रंग (जैसे फ्यूरा-2), आदि।
उलटा प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप एमएफ53-एन
वर्तमान में, प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप विभिन्न प्रयोगशालाओं और इमेजिंग प्लेटफार्मों का मानक इमेजिंग उपकरण बन गया है, और हमारे दैनिक प्रयोगों के लिए एक अच्छा सहायक है। प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी को मुख्य रूप से तीन श्रेणियों में विभाजित किया जाता है: ईमानदार प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी (विभाजन के लिए उपयुक्त), उल्टे प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी (सेक्शनिंग को ध्यान में रखते हुए जीवित कोशिकाओं के लिए उपयुक्त), प्रतिदीप्ति स्टीरियोस्कोप (बड़े नमूनों के लिए उपयुक्त, जैसे कि पौधे, जेब्राफिश (वयस्क/भ्रूण) ) , मेडका, माउस/चूहे के अंग, आदि)।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी इमेजिंग तकनीक व्यापक रूप से उपयोग की जाती है और प्रकारों में समृद्ध है, और नई प्रौद्योगिकियां अभी भी उभर रही हैं। आप अपना शोध पूरा करने के लिए तकनीक चुन सकते हैं।
