प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी पता लगाने की विधि
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी इम्यूनोफ्लोरेसेंस साइटोकैमिस्ट्री के लिए एक मौलिक उपकरण है। यह प्रकाश स्रोत, फिल्टर प्लेट सिस्टम और ऑप्टिकल सिस्टम जैसे मुख्य घटकों से बना है। यह नमूने को उत्तेजित करने और प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य का उपयोग करता है, जिसे नमूने की प्रतिदीप्ति छवि (चित्र 1) का निरीक्षण करने के लिए एक उद्देश्य और ऐपिस प्रणाली के माध्यम से बढ़ाया जाता है।
(1) प्रकाश स्रोत
आजकल, 200W अल्ट्रा-हाई प्रेशर पारा लैंप का उपयोग आमतौर पर प्रकाश स्रोत के रूप में किया जाता है। यह क्वार्ट्ज ग्लास से बना होता है, जिसके बीच में गोलाकार आकृति होती है और अंदर एक निश्चित मात्रा में पारा भरा होता है। ऑपरेशन के दौरान, दो इलेक्ट्रोडों के बीच डिस्चार्ज के कारण पारा वाष्पित हो जाता है, और गोले के अंदर दबाव तेजी से बढ़ जाता है। जब पारा पूरी तरह से वाष्पित हो जाता है, तो यह 50-70 मानक वायुमंडलीय दबाव तक पहुंच सकता है, जिसमें आम तौर पर लगभग 5-15 मिनट लगते हैं। अति-उच्च दबाव पारा लैंप की चमक इलेक्ट्रोड के बीच निर्वहन का परिणाम है, जो पारा अणुओं को लगातार अलग और कम करता है और फोटॉन उत्सर्जित करता है। यह मजबूत पराबैंगनी और नीली बैंगनी रोशनी उत्सर्जित करता है, जो विभिन्न फ्लोरोसेंट पदार्थों को उत्तेजित करने के लिए पर्याप्त है, इसलिए, इसका व्यापक रूप से फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप में उपयोग किया जाता है।
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का उपयोग करने के लिए सावधानियां
(1) फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप फैक्ट्री के निर्देशों का सख्ती से पालन करें और कार्यक्रम को मनमाने ढंग से न बदलें।
(2) निरीक्षण अंधेरे कमरे में किया जाना चाहिए। अंधेरे कमरे में प्रवेश करने के बाद, बिजली कनेक्ट करें और अल्ट्रा-हाई प्रेशर मरकरी लैंप को 5-15 मिनट के लिए जलाएं। प्रकाश स्रोत तेज रोशनी उत्सर्जित करने और स्थिर होने के बाद, नमूने का निरीक्षण शुरू करने से पहले आंखों को अंधेरे कमरे में पूरी तरह से अनुकूलित होना चाहिए।
(3) आंखों को यूवी क्षति से बचाने के लिए प्रकाश स्रोत को समायोजित करते समय सुरक्षात्मक चश्मा पहनना चाहिए।
(4) निरीक्षण का समय हर बार 1-2 घंटे होना चाहिए। यदि यह 90 मिनट से अधिक हो जाता है, तो अति-उच्च दबाव पारा लैंप की चमकदार तीव्रता धीरे-धीरे कम हो जाती है और प्रतिदीप्ति कमजोर हो जाती है; नमूने 3-5 दिनों तक पराबैंगनी विकिरण के संपर्क में रहे
मिनट के बाद, प्रतिदीप्ति भी काफी कम हो गई; इसलिए, अधिकतम अवधि 2-3 घंटे से अधिक नहीं होनी चाहिए।
(5) फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप प्रकाश स्रोत का जीवनकाल सीमित है, और समय बचाने के लिए नमूने की केंद्रीय जांच की जानी चाहिए
समय बचाएं और प्रकाश स्रोत की सुरक्षा करें। जब मौसम गर्म हो, तो गर्मी दूर करने और ठंडक पहुंचाने के लिए बिजली का पंखा लगाना चाहिए। नए प्रकाश बल्ब को प्रतिस्थापित करते समय, उपयोग का समय शुरू से ही दर्ज किया जाना चाहिए। जब लाइट बंद हो जाती है और आप इसे दोबारा उपयोग करना चाहते हैं, तो आपको इसे जलाने से पहले लाइट बल्ब के पर्याप्त रूप से ठंडा होने तक इंतजार करना होगा। दिन में कई बार प्रकाश स्रोत जलाने से बचें।
(6) धुंधला होने के तुरंत बाद नमूने का निरीक्षण करें, क्योंकि समय के साथ प्रतिदीप्ति धीरे-धीरे कमजोर हो जाएगी। यदि नमूना 4 डिग्री पर पॉलीथीन प्लास्टिक बैग में संग्रहीत किया जाता है, तो यह प्रतिदीप्ति क्षीणन समय में देरी कर सकता है और बढ़ते एजेंट के वाष्पीकरण को रोक सकता है।
(7) प्रतिदीप्ति चमक के लिए निर्णय मानदंड आम तौर पर चार स्तरों में विभाजित होते हैं, अर्थात् "एक" - कोई या दृश्यमान कमजोर प्रतिदीप्ति नहीं। "+" - केवल दृश्यमान प्रतिदीप्ति दिखाई देती है। ++- चमकदार प्रतिदीप्ति के साथ दृश्यमान। "+++" - दृश्यमान और चकाचौंध प्रतिदीप्ति।
