प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप को ऑप्टिकल पथ सिद्धांत के अनुसार दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है:
1। संचरण प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप
पुराने प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप नमूना सामग्री के माध्यम से उत्तेजना प्रकाश स्रोत को पारित करके प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए एक स्पॉटलाइट का उपयोग करते हैं। इसका लाभ कम आवर्धन पर मजबूत प्रतिदीप्ति है, लेकिन इसका नुकसान यह है कि बढ़ती आवर्धन के साथ इसकी प्रतिदीप्ति कम हो जाती है। तो यह केवल बड़े नमूना सामग्रियों को देखने के लिए उपयुक्त है।
2। प्रकाश प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप गिरना
उत्तेजना प्रकाश नमूना की सतह पर उद्देश्य लेंस से नीचे गिरता है, एक ही उद्देश्य लेंस का उपयोग करके रोशनी कंडेनसर और प्रतिदीप्ति एकत्र करने के लिए उद्देश्य लेंस का उपयोग करता है।
एक दोहरी रंग बीम स्प्लिटर (डाइक्रोइक मिरर) को ऑप्टिकल पथ में जोड़ा जाना चाहिए, जो ऑप्टिकल अक्ष के साथ 45 डिग्री कोण बनाता है। उत्तेजना प्रकाश उद्देश्य लेंस में परिलक्षित होता है और नमूने पर केंद्रित होता है। नमूने द्वारा उत्पन्न प्रतिदीप्ति, साथ ही साथ उद्देश्य लेंस और कवर ग्लास की सतह से परिलक्षित उत्तेजना प्रकाश, एक ही समय में उद्देश्य लेंस में प्रवेश करें और उत्तेजना प्रकाश और प्रतिदीप्ति को अलग करने के लिए दोहरे रंग बीम स्प्लिटर पर लौटें। अवशिष्ट उत्तेजना प्रकाश को तब फ़िल्टर अवशोषण द्वारा अवरुद्ध किया जाता है। यदि उत्तेजना फ़िल्टर के विभिन्न संयोजनों, दोहरे रंग बीम विभाजक, और अवरुद्ध फिल्टर का उपयोग किया जाता है, तो वे विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रतिक्रिया उत्पादों की जरूरतों को पूरा कर सकते हैं।
इस प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के फायदे एक समान क्षेत्र रोशनी, स्पष्ट इमेजिंग और बड़े आवर्धन के साथ मजबूत प्रतिदीप्ति हैं।
3। चरण विपरीत माइक्रोस्कोप
चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप एक माइक्रोस्कोप है जो प्रकाश अंतर (या ऑप्टिकल पथ अंतर) को परिवर्तित कर सकता है जब प्रकाश किसी वस्तु के माध्यम से आयाम (प्रकाश तीव्रता) में परिवर्तन में गुजरता है। मुख्य रूप से जीवित कोशिकाओं, अस्थिर ऊतक वर्गों, या सना हुआ नमूनों को देखने के लिए उपयोग किया जाता है।
मानव आंख केवल तरंग दैर्ध्य (रंग) और दृश्य प्रकाश के आयाम में परिवर्तन को अलग कर सकती है, लेकिन चरण में परिवर्तनों को अलग नहीं कर सकती है। अधिकांश जैविक नमूने अत्यधिक पारदर्शी होते हैं, और प्रकाश तरंगों का आयाम मूल रूप से केवल चरण परिवर्तन के साथ गुजरने के बाद अपरिवर्तित रहता है।
चरण कंट्रास्ट माइक्रोस्कोप मूल रूप से नमूना के माध्यम से गुजरने वाले दृश्य प्रकाश के ऑप्टिकल पथ अंतर को आयाम अंतर में बदल देता है, जिससे विभिन्न संरचनाओं के बीच विपरीत में सुधार होता है और उन्हें स्पष्ट और दृश्यमान बनाता है। नमूना से गुजरने के बाद, प्रकाश अपवर्तन से गुजरता है, मूल ऑप्टिकल पथ से विचलित होता है और 1/4 λ (तरंग दैर्ध्य) से देरी हो रहा है। यदि ऑप्टिकल पथ अंतर को एक और 1/4 λ द्वारा बढ़ाया या घटाया जाता है, तो ऑप्टिकल पथ का अंतर 1/2 λ हो जाता है, और अक्ष के संयुक्त होने के बाद दो प्रकाश बीमों के बीच हस्तक्षेप बढ़ जाता है या घट जाता है, इसके विपरीत में सुधार होता है।
