प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी युक्तियाँ और तरकीबें
(i) स्लाइड्स
स्लाइड की मोटाई 0.8 और 1.2 मिमी के बीच होनी चाहिए, बहुत मोटी ढलान, एक तरफ, अधिक प्रकाश अवशोषण, दूसरी तरफ, एकत्रित नमूने में प्रकाश की उत्तेजना नहीं कर सकती है। स्लाइड चिकनी, एक समान मोटाई की होनी चाहिए, कोई स्पष्ट ऑटोफ्लोरोसेंस नहीं होना चाहिए। कभी-कभी क्वार्ट्ज ग्लास स्लाइड की आवश्यकता होती है।
(ii) कवरस्लिप्स
कवरस्लिप की मोटाई लगभग 0.17 मिमी, साफ है। उत्तेजना प्रकाश को बढ़ाने के लिए, कवरस्लिप के साथ हस्तक्षेप करने के लिए भी इस्तेमाल किया जा सकता है, जो प्रकाश की विभिन्न तरंग दैर्ध्य की कई परतों के साथ चढ़ाया गया एक विशेष सतह है जो कवरस्लिप के पदार्थों (जैसे मैग्नीशियम फ्लोराइड) के हस्तक्षेप में एक अलग भूमिका निभाता है, जो प्रकाश की चिकनी और प्रतिबिंबित उत्तेजना के माध्यम से प्रतिदीप्ति बना सकता है, प्रकाश की प्रतिबिंबित उत्तेजना नमूना महिला की उत्तेजना हो सकती है।
(iii) नमूने
ऊतक खंड या अन्य नमूने बहुत मोटे नहीं हो सकते हैं, जैसे कि बहुत मोटी उत्तेजना प्रकाश ज्यादातर नमूने के निचले हिस्से में खपत होती है, और अपर्याप्त उत्तेजना के ऊपरी हिस्से में सीधे उद्देश्य लेंस मनाया जाता है। इसके अलावा, सेल ओवरलैप या अशुद्धियाँ मास्किंग, निर्णय को प्रभावित करती हैं।
(डी) सीलिंग एजेंट
सीलिंग एजेंट के रूप में आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला ग्लिसरॉल, ऑटोफ्लोरोसेंस से मुक्त, रंगहीन और पारदर्शी होना चाहिए, पीएच 8.5 ~ 9.5 में फ्लोरोसेंस की चमक अधिक चमकदार होती है, जो जल्दी से फीकी नहीं पड़ती। इसलिए, सीलिंग एजेंट के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला ग्लिसरीन और 0.5mol/lpH9.0 ~ 9.5 कार्बोनेट बफर का मिश्रण बराबर मात्रा में होता है।
(ई) दर्पण तेल
सामान्य अंधेरे क्षेत्र प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और तेल दर्पण नमूना अवलोकन, दर्पण तेल का उपयोग करना चाहिए, अधिमानतः विशेष गैर फ्लोरोसेंट दर्पण तेल का उपयोग करना, उपर्युक्त ग्लिसरॉल के स्थान पर भी इस्तेमाल किया जा सकता है, तरल पैराफिन का भी उपयोग किया जा सकता है, लेकिन निचले का अपवर्तक सूचकांक, छवि की गुणवत्ता को थोड़ा प्रभावित करता है।
