प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी नमूना तैयार करने की आवश्यकताएं
(i) स्लाइड्स
स्लाइड की मोटाई 0.8 और 1.2 मिमी के बीच होनी चाहिए, बहुत मोटी ढलान, एक तरफ, अधिक प्रकाश अवशोषण, दूसरी तरफ, एकत्रित नमूने में प्रकाश की उत्तेजना नहीं कर सकती है। स्लाइड चिकनी, एक समान मोटाई, कोई स्पष्ट ऑटोफ्लोरोसेंस नहीं होना चाहिए। कभी-कभी क्वार्ट्ज ग्लास स्लाइड का उपयोग करने की आवश्यकता होती है।
(ii) कवरस्लिप
कवरस्लिप लगभग 0.17 मिमी मोटे और चिकने होते हैं। उत्तेजना प्रकाश को बढ़ाने के लिए, कवरस्लिप के साथ हस्तक्षेप करने के लिए भी इस्तेमाल किया जा सकता है, यह प्रकाश की विभिन्न तरंग दैर्ध्य की कई परतों के साथ चढ़ाया गया एक विशेष सतह है जो कवरस्लिप के पदार्थों (जैसे मैग्नीशियम फ्लोराइड) के हस्तक्षेप में एक अलग भूमिका निभाता है, जो चिकनी के माध्यम से प्रतिदीप्ति बना सकता है और प्रकाश की उत्तेजना को प्रतिबिंबित कर सकता है, प्रकाश महिला की उत्तेजना का प्रतिबिंब नमूना की उत्तेजना हो सकती है।
(सी) नमूने
ऊतक खंड या अन्य नमूने बहुत मोटे नहीं हो सकते हैं, जैसे कि बहुत मोटी उत्तेजना प्रकाश ज्यादातर नमूने के निचले हिस्से में खपत होती है, और अपर्याप्त उत्तेजना के ऊपरी हिस्से में सीधे उद्देश्य लेंस मनाया जाता है। इसके अलावा, सेल ओवरलैप या अशुद्धियाँ नकाबपोश, निर्णय को प्रभावित करती हैं।
(डी) सीलिंग एजेंट
सीलिंग एजेंट आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला ग्लिसरॉल, कोई ऑटोफ्लोरोसेंस, रंगहीन और पारदर्शी नहीं होना चाहिए, पीएच 8.5 ~ 9.5 में फ्लोरोसेंस की चमक तेज होती है, जल्दी से फीका नहीं पड़ता। इसलिए, आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला ग्लिसरीन और 0.5 मोल / एल पीएच 9.0 ~ 9.5 कार्बोनेट बफर के बराबर मात्रा में मिश्रण सीलेंट के लिए।
(ई) दर्पण तेल
सामान्य डार्कफील्ड प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप और तेल दर्पण नमूना अवलोकन, दर्पण तेल का उपयोग करना चाहिए, * विशेष गैर-फ्लोरोसेंट दर्पण तेल का अच्छा उपयोग, उपरोक्त ग्लिसरॉल के स्थान पर भी इस्तेमाल किया जा सकता है, तरल पैराफिन का भी उपयोग किया जा सकता है, लेकिन अपवर्तक सूचकांक कम है, छवि गुणवत्ता थोड़ा प्रभावित है।
