प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप सिद्धांत अनुप्रयोग और उपयोग
(1) प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का सिद्धांत और संरचनात्मक विशेषताएं: प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप फिल्टर सिस्टम के माध्यम से एक निश्चित तरंग दैर्ध्य (जैसे पराबैंगनी प्रकाश 3650 इंच या बैंगनी नीली रोशनी 4200 इंच) के प्रकाश को उत्सर्जित करने के लिए उच्च चमकदार दक्षता वाले एक बिंदु प्रकाश स्रोत का उपयोग करता है। नमूने को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश के रूप में। अंदर का फ्लोरोसेंट पदार्थ विभिन्न रंगों की फ्लोरोसेंस उत्सर्जित करने के बाद, इसे ऑब्जेक्टिव लेंस और ऐपिस के आवर्धन के माध्यम से देखा जाता है। इस तरह, एक मजबूत कंट्रास्ट पृष्ठभूमि के तहत, भले ही प्रतिदीप्ति बहुत कमजोर हो, इसे पहचानना आसान है और इसमें उच्च संवेदनशीलता है। इसका उपयोग मुख्य रूप से कोशिका संरचना और कार्य और रासायनिक संरचना के अनुसंधान के लिए किया जाता है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप की मूल संरचना एक साधारण ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप और कुछ सहायक उपकरण (जैसे एक फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत, एक उत्तेजना फिल्टर, एक दो-रंग बीम स्प्लिटर और एक अवरुद्ध फिल्टर, आदि) से बनी होती है। फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत - आम तौर पर अल्ट्रा-उच्च दबाव पारा लैंप (50-200W) का उपयोग करते हैं, जो विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश का उत्सर्जन कर सकता है, लेकिन प्रत्येक फ्लोरोसेंट पदार्थ में एक उत्तेजना तरंग दैर्ध्य होता है जो सबसे मजबूत प्रतिदीप्ति पैदा करता है, इसलिए एक उत्तेजना फिल्टर (आम तौर पर, इसमें पराबैंगनी, बैंगनी, नीले और हरे उत्तेजना फिल्टर होते हैं), जो केवल एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के उत्तेजना प्रकाश को गुजरने देते हैं और अन्य प्रकाश को अवशोषित करते हुए नमूने को विकिरणित करते हैं। प्रत्येक पदार्थ को उत्तेजना प्रकाश द्वारा विकिरणित करने के बाद, यह बहुत ही कम समय में विकिरण तरंग दैर्ध्य की तुलना में लंबी तरंग दैर्ध्य के साथ दृश्यमान प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। प्रतिदीप्ति विशिष्ट है और आमतौर पर उत्तेजना प्रकाश की तुलना में कमजोर है। विशिष्ट प्रतिदीप्ति का निरीक्षण करने के लिए, ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे एक अवरुद्ध (या दबाने वाला) फ़िल्टर की आवश्यकता होती है। इसके दो कार्य हैं: एक है उत्तेजना प्रकाश को अवशोषित करना और उसे ऐपिस में प्रवेश करने से रोकना, ताकि प्रतिदीप्ति में गड़बड़ी न हो और आंखों को नुकसान न पहुंचे; दूसरा है विशिष्ट प्रतिदीप्ति का चयन करना और उसे गुजरने देना, एक विशिष्ट प्रतिदीप्ति रंग दिखाना। दोनों फ़िल्टर का उपयोग एक साथ किया जाना चाहिए।
उनके ऑप्टिकल पथ के संदर्भ में प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी दो प्रकार के होते हैं:
1. ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप: प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश स्रोत को कंडेनसर लेंस के माध्यम से नमूना सामग्री के माध्यम से पारित किया जाता है। आमतौर पर एक डार्क फील्ड कलेक्टर का उपयोग किया जाता है, और एक साधारण कलेक्टर का उपयोग दर्पण को समायोजित करने के लिए भी किया जा सकता है ताकि उत्तेजना प्रकाश को पुनर्निर्देशित किया जा सके और नमूने को बायपास किया जा सके। यह एक पुराना फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप है। लाभ यह है कि कम आवर्धन पर प्रतिदीप्ति मजबूत होती है, लेकिन नुकसान यह है कि आवर्धन बढ़ने के साथ प्रतिदीप्ति कम हो जाती है। इसलिए, बड़े नमूना सामग्रियों का निरीक्षण करना बेहतर है।
2. एपि-फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप आधुनिक समय में विकसित एक नए प्रकार का फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप है। अंतर यह है कि उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस से नमूने की सतह पर गिरता है, अर्थात, एक ही वस्तुनिष्ठ लेंस का उपयोग रोशनी कंडेनसर और प्रतिदीप्ति एकत्र करने के लिए वस्तुनिष्ठ लेंस के रूप में किया जाता है। प्रकाश पथ में एक डाइक्रोइक बीम स्प्लिटर जोड़ने की आवश्यकता है, जो प्रकाश यूरेनियम से 45 डिग्री दूर है। उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस में परावर्तित होता है और नमूने पर एकत्रित होता है। नमूने द्वारा उत्पन्न प्रतिदीप्ति और वस्तुनिष्ठ लेंस की लेंस सतह और आवरण कांच की सतह द्वारा परावर्तित उत्तेजना प्रकाश एक ही समय में वस्तुनिष्ठ लेंस में प्रवेश करती है, और उत्तेजना प्रकाश को प्रतिदीप्ति से अलग करने के लिए दो-रंग बीम विभाजक पर लौट आती है। , अवशिष्ट उत्तेजना प्रकाश को फिल्टर को अवरुद्ध करके अवशोषित किया जाता है। जैसे कि विभिन्न उत्तेजना फिल्टर/दो-रंग बीम स्प्लिटर/ब्लॉकिंग फिल्टर के संयोजन में बदलना, यह विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रतिक्रिया उत्पादों की जरूरतों को पूरा कर सकता है। इस प्रकार के प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का लाभ यह है कि दृश्य क्षेत्र की रोशनी एक समान होती है, इमेजिंग स्पष्ट होती है, और आवर्धन जितना अधिक होगा, प्रतिदीप्ति उतनी ही मजबूत होगी।
(2) प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का उपयोग कैसे करें।
1. प्रकाश स्रोत चालू करें, और अति-उच्च दबाव वाले पारा लैंप को सबसे चमकीले बिंदु तक पहुंचने के लिए कुछ मिनटों तक गर्म करने की आवश्यकता होती है।
2. ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप को प्रकाश स्रोत और कंडेनसर के बीच आवश्यक उत्तेजना फ़िल्टर स्थापित करने की आवश्यकता होती है, और ऑब्जेक्टिव लेंस के पीछे संबंधित अवरोधक फ़िल्टर स्थापित करना होता है। एपि-फ़्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप को प्रकाश पथ में स्लॉट्स में आवश्यक उत्तेजना फ़िल्टर/दोहरे रंग बीम स्प्लिटर/अवरुद्ध फ़िल्टर आवेषण डालने की आवश्यकता होती है।
3. कम-आवर्धन लेंस के साथ निरीक्षण करें, और प्रकाश स्रोत के केंद्र को समायोजित करें ताकि यह प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी के विभिन्न मॉडलों के समायोजन उपकरण के अनुसार पूरे रोशनी स्थान के केंद्र में स्थित हो।
4. नमूना टुकड़ा रखें और ध्यान केंद्रित करने के बाद निरीक्षण करें। उपयोग के दौरान ध्यान दिया जाना चाहिए: अंत फिल्टर के साथ सीधे निरीक्षण न करें, ताकि आंखों को नुकसान न हो; तेल लेंस के साथ नमूनों का अवलोकन करते समय, प्रतिदीप्ति के बिना एक विशेष तेल लेंस का उपयोग किया जाना चाहिए; उच्च दबाव पारा लैंप बंद होने के बाद, इसे तुरंत फिर से चालू नहीं किया जा सकता है, इसका परीक्षण करने की आवश्यकता है। इसे 5 मिनट के बाद पुनः चालू किया जा सकता है, अन्यथा यह अस्थिर होगा और पारा लैंप के जीवन को प्रभावित करेगा।
(3) नीले-बैंगनी प्रकाश फिल्टर के साथ शिक्षण मंच पर फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के नीचे 0.01 प्रतिशत एक्रिडीन ऑरेंज फ्लोरोसेंट डाई से रंगी कोशिकाओं का निरीक्षण करें। नाभिक और साइटोप्लाज्म प्रतिदीप्ति के दो अलग-अलग रंगों (गहरा हरा और नारंगी-लाल) का उत्पादन करने के लिए उत्साहित होते हैं।
