कन्फोकल लेजर माइक्रोस्कोपी की विशेषताएं और अनुप्रयोग
लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोप (एलएससीएम) एक प्रकार का माइक्रोस्कोप है जिसे कंजुगेट फोकस तकनीक के आधार पर डिजाइन किया गया है, यानी लेजर प्रकाश स्रोत, परीक्षण के तहत नमूना और डिटेक्टर सभी को एक दूसरे की संयुग्म स्थिति में बनाने के लिए।
मौलिक
सामान्य सूक्ष्मदर्शी में, वस्तुनिष्ठ लेंस का फोकल तल डिटेक्टर के साथ मेल खाता है ताकि प्रेक्षित छवि तल आसन्न अक्षीय तल से अलग हो जाए, जबकि कन्फोकल सूक्ष्मदर्शी में, नमूना एक विवर्तन-सीमित प्रकाश स्थान का उपयोग करके प्रकाशित किया जाता है, और यह अलगाव प्रभाव रिज़ॉल्यूशन में सुधार के लिए आवारा प्रकाश को फ़िल्टर करने के लिए स्पॉट संयुग्म के केंद्र बिंदु पर संग्रह प्रकाश पथ में एक पिनहोल का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है।
इमेजिंग सुविधाएँ
केवल संयुग्मित नमूना परत से परावर्तित प्रकाश ही संग्रह प्रकाश पथ में छोटे छेद से गुजर सकता है, और शेष अप्रासंगिक नमूना परत प्रतिबिंब छोटे छेद द्वारा अवरुद्ध हो जाते हैं। इसके परिणामस्वरूप रिज़ॉल्यूशन में उल्लेखनीय वृद्धि हो सकती है। नीचे एक ही मोटे नमूने की बहुआयामी प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और कन्फोकल माइक्रोस्कोपी की एक साथ-साथ तुलना दिखाई गई है। जब विभिन्न फोकल विमानों पर छवियों की एक श्रृंखला ली जाती है, तो जिसे आमतौर पर "जेड-स्टैक" कहा जाता है, उत्पन्न किया जा सकता है, और यह छवि कन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा पेश किए गए रिज़ॉल्यूशन और कंट्रास्ट लाभ और इन लाभों के अंतर्निहित कारणों दोनों को दिखाती है। ऊतक के ऊपर इमेजिंग विमान के साथ स्टैक के शीर्ष पर छवि की जांच करने से प्रतिदीप्ति छवि में बहुत अधिक बिखरी हुई रोशनी का पता चलता है, जबकि कन्फोकल छवि काली दिखाई देती है। अक्षीय दिशा में पीएसएफ में यह कमी ज़ेड-स्टैक के मध्य में ऑप्टिकल इंटरफ़ेस पर देखे गए रिज़ॉल्यूशन में अंतर के लिए सीधे जिम्मेदार है।
लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोपी की एक अन्य विशेषता यह है कि यह एक स्कैनिंग इमेजिंग तकनीक है। पारंपरिक वाइड-फील्ड रोशनी तकनीक पूरे नमूने को रोशन करती है, इसलिए छवि को सीधे नग्न आंखों या डिटेक्टर द्वारा कैप्चर किया जा सकता है, लेकिन एलएससीएम एक बीम का उपयोग करता है या स्कैनिंग और इमेजिंग के लिए एकाधिक केंद्रित बीम नमूने से गुजरते हैं, और परिणामी छवि होती है ऑप्टिकल अनुभाग कहा जाता है। निम्नलिखित पारंपरिक वाइड-फील्ड रोशनी विधि और लेजर स्कैनिंग कन्फोकल रोशनी विधि के बीच अंतर दिखाता है।
इसलिए, आधुनिक कन्फोकल माइक्रोस्कोप की एक व्यावहारिक कार्य विधि नीचे दिए गए चित्र में दिखाई गई है। लेज़र द्वारा उत्सर्जित उत्तेजना प्रकाश एक डाइक्रोइक दर्पण से होकर गुजरता है और कंपन दर्पणों की एक जोड़ी के माध्यम से नमूने की x और y दिशाओं में स्कैन करता है। नमूने का उत्तेजना (या प्रतिबिंब) प्रकाश पिनहोल के माध्यम से पीएमटी डिटेक्टर में प्रवेश करता है और रिकॉर्ड किया जाता है, और वास्तविक नमूना छवि प्राप्त करने के लिए रिकॉर्ड की गई स्कैनिंग छवि को कंप्यूटर द्वारा पुनर्निर्मित किया जाता है।
