माइक्रोबियल माइक्रोस्कोपी प्रत्यक्ष गणना विधि के प्रायोगिक सिद्धांत
हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके माइक्रोस्कोप के नीचे प्रत्यक्ष गिनती सूक्ष्मजीवों की गिनती के लिए आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली विधि है। इस विधि का लाभ यह है कि यह सहज और तेज़ है। उचित रूप से पतला बैक्टीरिया निलंबन (या बीजाणु निलंबन) को हेमोसाइटोमीटर की स्लाइड और कवरस्लिप के बीच गिनती कक्ष में रखें, और माइक्रोस्कोप के नीचे गिनती करें। चूँकि गिनती कक्ष का आयतन निश्चित है (0.1 mm2), इसे माइक्रोस्कोप के नीचे देखे गए सूक्ष्मजीवों की संख्या के आधार पर प्रति इकाई आयतन में कुल सूक्ष्मजीवों की संख्या में परिवर्तित किया जा सकता है। चूँकि यह विधि जीवित और मृत बैक्टीरिया की कुल संख्या की गणना करती है, इसलिए इसे कुल बैक्टीरिया गणना विधि भी कहा जाता है।
हेमोसाइटोमीटर आमतौर पर एक विशेष स्लाइड होती है जिसमें चार स्लॉट होते हैं जो तीन प्लेटफ़ॉर्म बनाते हैं। बीच का प्लेटफ़ॉर्म एक छोटे क्षैतिज खांचे द्वारा दो हिस्सों में विभाजित होता है। प्लेटफ़ॉर्म पर प्रत्येक तरफ एक चौकोर ग्रिड उकेरा गया है। प्रत्येक चौकोर ग्रिड नौ बड़े वर्गों में विभाजित है। बीच में बड़ा वर्ग गिनती कक्ष है। सूक्ष्मजीवों की गिनती गिनती कक्ष में होती है। हेमोसाइटोमीटर की संरचना चित्र Ⅷ-1 में दिखाई गई है।
गिनती कक्ष के पैमाने में आम तौर पर दो विशिष्टताएँ होती हैं। एक बड़ा वर्ग है जिसे 16 मध्यम वर्गों में विभाजित किया गया है, और प्रत्येक मध्यम वर्ग को 25 छोटे वर्गों में विभाजित किया गया है (चित्र Ⅷ-2); दूसरा एक बड़ा वर्ग है। वर्ग ग्रिड को 25 मध्यम वर्गों में विभाजित किया गया है, और प्रत्येक मध्यम वर्ग को 16 छोटे वर्गों में विभाजित किया गया है (चित्र VIII-1, C)। लेकिन कोई फर्क नहीं पड़ता कि यह किस तरह का काउंटिंग बोर्ड है, प्रत्येक बड़े वर्ग में छोटे वर्गों की संख्या समान है, यानी 16 × 25=400 छोटे वर्ग, जैसा कि चित्र Ⅷ-2 में दिखाया गया है।
प्रत्येक बड़े वर्ग की भुजा की लंबाई 1 मिमी है, इसलिए प्रत्येक बड़े वर्ग का क्षेत्रफल 1 मिमी2 है। कवर ग्लास को ढकने के बाद, स्लाइड और कवर ग्लास के बीच की ऊंचाई 0.1 मिमी है, इसलिए गिनती कक्ष का आयतन 0.1 मिमी3 है।
गिनती करते समय, आमतौर पर पांच मध्यम वर्गों में बैक्टीरिया की कुल संख्या की गणना करें, फिर प्रत्येक मध्य वर्ग का औसत मूल्य ज्ञात करें, और फिर एक बड़े वर्ग में बैक्टीरिया की कुल संख्या प्राप्त करने के लिए 16 या 25 से गुणा करें, और फिर गणना करें 1 मिलीलीटर बैक्टीरिया समाधान में बैक्टीरिया की कुल संख्या में परिवर्तित करें।
