लेजर स्कैनिंग मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी के लाभों को बढ़ाना
लेजर स्कैनिंग मल्टीफ़ोटोन माइक्रोस्कोपी ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी पर एक बड़ा सुधार है। यह जीवित कोशिकाओं, स्थिर कोशिकाओं और ऊतकों की गहरी संरचना का निरीक्षण कर सकता है, और स्पष्ट और तीक्ष्ण बहु-परत Z-प्लेन संरचनाएँ प्राप्त कर सकता है, अर्थात ऑप्टिकल सेक्शन, जिससे यह नमूने की त्रि-आयामी ठोस संरचना का निर्माण कर सकता है। कॉन्फ़ोकल माइक्रोस्कोपी एक लेज़र प्रकाश स्रोत का उपयोग करता है, जो विस्तार के बाद, ऑब्जेक्टिव लेंस के पूरे बैक फ़ोकल प्लेन को भर देता है, और फिर ऑब्जेक्टिव लेंस के लेंस सिस्टम से गुज़रकर नमूने के फ़ोकल प्लेन पर एक बहुत छोटे बिंदु में परिवर्तित हो जाता है। ऑब्जेक्टिव लेंस के संख्यात्मक एपर्चर के आधार पर, सबसे चमकीले रोशनी बिंदु का व्यास लगभग 0.25 ~ 0.8μm है, और गहराई लगभग 0.5 ~ 1.5μm है। कॉन्फ़ोकल स्पॉट का आकार माइक्रोस्कोप डिज़ाइन, लेजर तरंग दैर्ध्य, ऑब्जेक्टिव लेंस विशेषताओं, स्कैनिंग यूनिट स्थिति सेटिंग्स और नमूना गुणों पर निर्भर करता है। फ़ील्ड माइक्रोस्कोपी में एक बड़ी रोशनी रेंज और गहराई होती है, जबकि कॉन्फ़ोकल माइक्रोस्कोपी में फ़ोकल प्लेन पर एक फ़ोकल पॉइंट पर केंद्रित रोशनी होती है। कन्फोकल माइक्रोस्कोपी का सबसे बुनियादी लाभ यह है कि यह मोटे फ्लोरोसेंट नमूनों (जो 50 μm या उससे अधिक तक पहुँच सकते हैं) की बारीक ऑप्टिकल सेक्शनिंग कर सकता है, और सेक्शन की मोटाई लगभग 0.5 से 1.5 μm होती है। माइक्रोस्कोप के Z-अक्ष स्टेपर मोटर का उपयोग करके नमूने को ऊपर और नीचे ले जाकर ऑप्टिकल सेक्शन छवियों की एक श्रृंखला प्राप्त की जा सकती है। छवि जानकारी का अधिग्रहण विमान के भीतर नियंत्रित किया जाता है और नमूने पर अन्य स्थानों से उत्सर्जित संकेतों द्वारा हस्तक्षेप नहीं किया जाएगा। पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति के प्रभाव को हटाने और संकेत-से-शोर अनुपात को बढ़ाने के बाद, पारंपरिक क्षेत्र-प्रबुद्ध प्रतिदीप्ति छवियों की तुलना में कन्फोकल छवियों के विपरीत और संकल्प में काफी सुधार हुआ है। कई नमूनों में, कई जटिल संरचनात्मक घटक जटिल प्रणालियों को बनाने के लिए आपस में जुड़े होते हैं, लेकिन एक बार पर्याप्त ऑप्टिकल सेक्शन एकत्र किए जा सकते हैं, हम उन्हें सॉफ्टवेयर के माध्यम से तीन आयामों में फिर से बना सकते हैं। कोशिकाओं या ऊतकों के बीच जटिल संरचनात्मक और कार्यात्मक संबंधों को स्पष्ट करने के लिए जैविक अनुसंधान में इस प्रयोगात्मक विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है।
