प्रत्यक्ष माइक्रोबियल गिनती विधि
1. तनुकरण
ब्रूइंग यीस्ट के सस्पेंशन को उचित रूप से पतला करें। यदि जीवाणु समाधान केंद्रित नहीं है, तो इसे पतला करने की आवश्यकता नहीं है।
2. दर्पण निरीक्षण मतगणना कक्ष
नमूने डालने से पहले काउंटिंग बोर्ड के काउंटिंग चैंबर की सूक्ष्म जांच कर लें। यदि गंदगी है तो गिनती से पहले उसे साफ करना होगा।
3. नमूने जोड़ें
साफ और सूखी रक्त कोशिका गिनने वाली प्लेट को एक कवर ग्लास से ढक दें, और फिर कवर ग्लास के किनारे से पतला ब्रूइंग यीस्ट तरल की एक छोटी बूंद (बहुत ज्यादा नहीं) गिराने के लिए एक बाँझ महीन मुँह वाले ड्रॉपर का उपयोग करें, जिससे जीवाणु तरल को अंदर जाने दिया जा सके। अंतराल के साथ केशिका प्रवेश के माध्यम से गिनती कक्ष में प्रवेश करें। आम तौर पर, मतगणना कक्ष जीवाणु द्रव्य से भरा हो सकता है। सावधान रहें कि बुलबुले न बनें।
4. माइक्रोस्कोप गिनती
5 मिनट तक स्थिर खड़े रहने के बाद, रक्त कोशिका गिनती प्लेट को माइक्रोस्कोप स्टेज पर रखें, गिनती कक्ष का पता लगाने के लिए पहले कम-शक्ति वाले माइक्रोस्कोप का उपयोग करें, और फिर गिनती के लिए उच्च-शक्ति माइक्रोस्कोप पर स्विच करें। यदि गिनती से पहले बैक्टीरिया का घोल बहुत अधिक गाढ़ा या बहुत पतला पाया जाता है, तो गिनती से पहले पतलापन को फिर से समायोजित किया जाना चाहिए। सामान्य नमूना तनुकरण की आवश्यकता प्रति छोटे ग्रिड में लगभग 5-10 जीवाणु कोशिकाएँ होती हैं। गिनती के लिए प्रत्येक मतगणना कक्ष से 5 कक्षों (वैकल्पिक 4 कोने और केंद्रीय कक्ष) का चयन करें। ग्रिड लाइन पर स्थित जीवाणु कोशिकाएं आम तौर पर केवल ऊपरी और दाहिनी रेखाओं पर ही गिनी जाती हैं। जब यीस्ट अंकुरित होता है और कली का आकार मातृ कोशिका के आधे तक पहुँच जाता है, तो दो जीवाणु गणनाएँ ली जाती हैं। किसी नमूने की गिनती के लिए नमूने में बैक्टीरिया की मात्रा की गणना करने के लिए दो गिनती कक्षों से मान प्राप्त करने की आवश्यकता होती है।
5. हीमोसाइटोमीटर को साफ करें
उपयोग के बाद, हेमोसाइटोमीटर को नल पर लगे पानी के कॉलम से धो लें। कठोर वस्तुओं से न धोएं. धोने के बाद, हवा में सुखाएं या हेयर ड्रायर से ब्लो ड्राई करें। सूक्ष्म परीक्षण, निरीक्षण करें कि क्या प्रत्येक छोटी कोशिका में अवशिष्ट बैक्टीरिया या अन्य तलछट हैं। यदि यह साफ नहीं है तो इसे साफ होने तक बार-बार धोना चाहिए।
